牛病毒性腹泻病毒NS3基因的序列分析、表达与抗原性鉴定  

Sequence analysis,expression and antigenicity detection of bovine viral diarrhea virus NS3 gene

作　　者：李岩[1] 聂明非[1] 魏伟[1] 温凯[1] 贾莹[1] 霍慧[1] 王君伟[1] 

机构地区：[1]东北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030

出　　处：《生物工程学报》2010年第3期311-316,共6页Chinese Journal of Biotechnology

基　　金：现代农业产业技术体系建设专项资金(No.NYCYTX-0303)资助~~

摘　　要：本研究应用套式RT-PCR方法扩增出牛病毒性腹泻病毒VEDEVAC株编码NS3蛋白的基因,克隆至表达载体pET-30a(+),并进行测序。对瘟病毒属病毒NS3基因进行氨基酸差异性分析,显示平均P-distance为0.07,系统进化树分析表明VEDEVAC株隶属于BVDV1型。将构建成功的重组质粒转化大肠埃希氏菌Rosetta(DE3),在IPTG诱导下表达NS3重组蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化和尿素梯度透析后进行反应原性鉴定。Western blotting结果显示表达的重组蛋白可以与牛病毒性腹泻病毒阳性血清反应,并与猪瘟阳性血清有交叉反应,ELISA结果显示该重组蛋白具有良好的反应原性。所获得的蛋白为建立针对NS3抗体的ELISA检测方法奠定了基础。In this study, we cloned the NS3 gene from bovine viral diarrhea virus （BVDV） VEDEVAC strain. The result showed that the average P-distance of Pestivirus NS3 amino acid sequence was 0.07 and the VEDEVAC strain was classified to BVDV type 1. Using pET-30a（＋） as vector and Escherichia coli Rosetta （DE3） as host, we obtained purified recombinant NS3 protein by Ni-NTA affinity chromatography. Western blotting analysis demonstrated that both BVDV positive serum and classical swine fever virus （CSFV） positive serum were able to recognize the recombinant NS3 protein. Indirect-ELISA assay indicated that the protein could be used as detection antigen.

关 键 词：牛病毒性腹泻病毒 NS3蛋白 差异性分析 进化树 抗原性 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学]