抗GBM抗体特异性单链抗体scFv3原核表达载体的构建及表达  

作　　者：王雅楠[1] 刘章锁[1] 邢国兰[1] 赵国强[1] 肖静[1] 王沛[1] 

机构地区：[1]郑州大学第一附属医院肾内科,河南郑州450000

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2010年第3期255-257,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家卫生部资助项目(WKJ2007-2-033);河南省医学科技攻关重大项目(200701006)

摘　　要：目的:构建单链抗体scFv3的原核表达载体pET28a-scFv3并诱导表达,纯化并检测表达产物的免疫抗原性。方法:用PCR扩增抗肾小球基底膜(GBM)抗体单链抗体scFv3基因,构建pGEM-scFv3重组质粒并测序。将重组基因亚克隆于原核表达载体pET28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,亲和层析法纯化,用间接ELISA检测纯化的单链抗体scFv3的免疫抗原性。结果:酶切和测序证实得到的scFv3基因序列正确。间接ELISA检测表明,纯化获得的scFv3能与抗GBM抗体结合。结论:成功构建了pET28a-scFv3原核表达系统并获得纯化的scFv3蛋白。表达产物具有良好的抗原性,为进一步研究该单链抗体在抗GBM抗体病中的治疗作用奠定了基础。

关 键 词：pET28a-scFv3 蛋白表达 纯化 抗GBM抗体 

分 类 号：Q782[生物学—分子生物学]