D2蛋白酶双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立  

作　　者：苏洁[1] 王斌[1] 鲁晓晴[1] 赵巍[1] 闫志勇[1] 钱冬萌[1] 丁守怡[1] 宋旭霞[1] 杨丽[1] 

机构地区：[1]青岛大学医学院微生物学教研室,山东青岛266071

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2010年第3期278-280,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家重点基础研究发展计划(973)资助项目(2004CCA02400)

摘　　要：目的：建立一种定量测定D2蛋白酶的双抗体夹心ELISA方法。方法：用棋盘滴定法确定捕获抗体、检测抗体的最佳工作浓度;绘制标准曲线,确定线性范围、检测限和定量限;检测该方法的准确性（回收率）、精密性和特异性,并与Bradford法检测结果进行比较。结果：包被抗体和捕获抗体的最佳包被效价分别为1∶4 000和1∶5 000;检测的线性范围为（28~1 180）μg/L,检测限为4.6μg/L。经方法学考核,批内、批间变异系数分别为5.64%和7.17%,回收率为92.44%~105.26%,与碱性蛋白酶、蛋白酶K等其他蛋白无交叉反应,与Bradford法检测结果具有良好的相关性。结论：该方法灵敏度高,重复性好,为后期D2蛋白酶规模发酵优化、分离纯化研究提供了定量检测的方法,并为后期药代动力学、临床研究提供了思路和备选方法。

关 键 词：D2蛋白酶 ELISA双抗体夹心法 定量检测 

分 类 号：R392.11[医药卫生—免疫学]