亲环素A的原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体制备  

Prokaryotic expression,purification and polyclonal antibody preparation of Cyclophilin A

作　　者：张慧珍[1] 王钧[1] 金蕾[1] 吴逸明[1] 

机构地区：[1]郑州大学公共卫生学院,郑州450001

出　　处：《第二军医大学学报》2010年第4期445-447,共3页Academic Journal of Second Military Medical University

摘　　要：目的构建人亲环素A(CypA)基因的原核表达载体,诱导表达、纯化蛋白,制备抗体,为进一步研究其生物学作用奠定基础。方法以人肺癌组织总RNA为模板,RT-PCR扩增CypA基因片段,克隆到pMD18-T载体中。扩增产物与原核表达载体pET30a(+)连接,构建表达质粒pET30a-CypA,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,用镍树脂亲和层析柱High-Affinity Ni-IDA Resin纯化表达产物,SDS-PAGE检测纯化蛋白。用获得的蛋白免疫大白兔,制备抗CypA蛋白多抗,采用蛋白印迹法检测抗体特异性。结果成功构建了CypA的原核表达载体,经大肠杆菌诱导表达、镍亲和层析柱纯化,得到纯度达80.2%的融合蛋白,免疫大白兔后得到多抗血清。蛋白印迹结果显示此多克隆抗体能与CypA蛋白特异性结合。结论成功获得CypA纯化蛋白及CypA多克隆抗体,为进一步研究CypA在肺癌中的作用机制奠定了基础。

关 键 词：亲环素A 原核表达 分离纯化 亲和层析 多克隆抗体 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]