GST-Glypican 3 N端融合蛋白表达载体构建及表达纯化  

作　　者：肖明兵[1] 赵敏星[1] 倪润洲[1] 江枫[1] 周嘉伟[2] 

机构地区：[1]南通大学附属医院消化病研究室,江苏南通226001 [2]中国科学院上海神经科学研究所,上海200030

出　　处：《临床检验杂志》2010年第3期212-214,共3页Chinese Journal of Clinical Laboratory Science

基　　金：南通市社会发展计划项目(S7943)

摘　　要：目的构建人磷酯酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican3,GPC3)N端蛋白与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达及纯化。方法以重组质粒pcDNA3.1-GPC3N为模板,扩增GPC3 N端基因,产物经纯化回收后与载体PGEX-4T-1连接并转化大肠埃希菌Rosetta,酶切鉴定序列完全正确者诱导表达GST-GPC3 N端融合蛋白,并以谷胱甘肽琼脂糖小珠亲和纯化。结果Glypican 3 N端基因片段成功插入载体PGEX-4T-1,插入位点及碱基序列完全正确,转化Rosetta后,经IPGT诱导成功表达分子质量为64 000的GST-GPC3 N端融合蛋白。结论成功建立了重组GST-GPC3 N端融合蛋白的原核表达载体、表达菌株及诱导表达和纯化的方法,为GPC3 N端融合蛋白的进一步应用打下基础。

关 键 词：磷酯酰肌醇蛋白聚糖3 载体 克隆 表达 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]