HIV-1 nef基因的克隆及原核表达研究  被引量:2

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作  者:闻洁君[1] 江文正[1] 郝文丽[1] 杜佳妮[1] 樊燕[1] 钱旻[1] 

机构地区:[1]华东师范大学生命科学学院,上海200062

出  处:《细胞与分子免疫学杂志》2010年第4期348-350,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基  金:上海市青年科技启明星计划资助项目(06QA14017)

摘  要:目的:构建HIV-1 Nef基因的原核表达载体并在大肠杆菌中进行表达,初步优化其表达条件。方法:利用特异性引物PCR扩增获得HIV-1 Nef基因片段,PCR产物经限制性内切酶双酶切后连接载体pET24a(+),构建重组质粒pET24a(+)-Nef。经双酶切鉴定及序列测定后的重组质粒转化入E.coliBL21,IPTG诱导表达目的蛋白,优化表达条件,SDS-PAGE及Western blot分析鉴定表达产物。结果:PCR扩增获得618bpDNA片段,酶切鉴定结果表明HIV Nef基因已克隆入原核表达载体pET24a(+)中,测序证明序列正确。SDS-PAGE和Western blot分析证实重组菌诱导后可表达相对分子质量(Mr)符合预期的融合蛋白。0.1mmol/LIPTG在37℃诱导6h为最佳表达条件,重组蛋白表达量可由15.8%增加到43.9%。结论:在大肠杆菌中成功地表达了HIV Nef蛋白,并初步获得了最优化的表达条件。

关 键 词:人免疫缺陷病毒Ⅰ型 NEF蛋白 原核表达 

分 类 号:R392.11[医药卫生—免疫学]

 

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