猪圆环病毒2型衣壳蛋白(Cap)在293T细胞中的亚细胞定位  

Expression and subcellular localization of porcine circovirus type 2 Cap protein in 293T cells

作　　者：符芳[1,2] 李曦[2] 李雪松[2] 李海忠[2] 陈欣[2] 王伟[2] 魏萍 

机构地区：[1]东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨150030 [2]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨150001

出　　处：《中国预防兽医学报》2010年第5期338-341,共4页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

基　　金：黑龙江省自然基金重点项目(ZJN0503-02)

摘　　要：猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因编码病毒的核衣壳蛋白(Cap),该蛋白属于病毒保护性抗原,具有重要免疫功能。本研究以PCV2871毒株基因组为模板,用特异性上下游引物扩增获得ORF2基因,利用真核表达载体构建了表达PCV2Cap蛋白的重组质粒pCAGGS-ORF2。采用脂质体将pCAGGS-ORF2转染至293T细胞,用抗PCV2-Cap单克隆抗体对重组质粒转染细胞进行了免疫活性分析和免疫荧光检测,表明Cap蛋白在细胞中获得表达;利用共聚焦显微镜对Cap蛋白在293T细胞中的亚细胞定位观察结果表明,转染24h后可见Cap蛋白的表达随培养时间延长显著增多,72h达到高峰,表达的Cap蛋白主要分布在细胞核中。构建的pCAGGS-ORF2真核表达重组质粒在293T细胞中的表达,为进一步PCV2基因疫苗的研制奠定了基础。The capsid protein encoded by ORF2 gene of porcine circovirus type 2（PCV2） was an important protective antigen.In this study,the recombinant plasmid expressing capsid protein was constructed by inserting the ORF2 PCR product into eukaryotic expression vector pCAGGS and transfected into the 293T cells by Liposome-mediated transfection.Western blot and indirect immunofluorescence assay with specific monoclonal antibody verified that the capsid protein was expressed in the 293T cells.The expressed protein was localized in the nucleus under confocal microscopy and the highest level of expression was detected at 72 hour post transfection.

关 键 词：猪圆环病毒2型 核衣壳蛋白 真核表达 亚细胞定位 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学]