活体电穿孔法辅助HE4基因免疫小鼠制备单克隆抗体  

作　　者：栾好飞[1,2] 高新[2] 卞丽红[3] 付洁[2] 邱伟成[2] 董立厚[2] 范礼斌[1] 宋海峰[1,2] 

机构地区：[1]安徽医科大学基础医学院,安徽合肥230032 [2]军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京100850 [3]军事医学科学院附属医院妇科,北京100071

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2010年第7期660-662,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

摘　　要：目的：采用电穿孔辅助DNA免疫方法制备小鼠抗人附睾蛋白4（HFA）单克隆抗体（mAb）并对其生物学特性进行鉴定。方法：利用逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）从卵巢癌患者组织中获得人HFA基因编码序列，将其亚克隆至pPICZαA表达载体中并测序鉴定。采用活体电穿孔法免疫BALB／c小鼠。单抗制备采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合，经多次克隆化培养，筛选出特异分泌鼠抗人HFAmAb的杂交瘤细胞株。采用Westernblot，Ig亚型分析和mAb表位分析等对mAb的生物学特性进行鉴定。结果：获得2株持续、稳定分泌鼠抗人I-IFAmAb的杂交瘤细胞株，命名为1—7-C和3-12-C。ELISA和Westernblot结果均显示本实验获得的2株mAb能够特异识别有天然构象的HFA蛋白，2株mAb的Ig亚类均为IgM，轻链均为入链。结论：成功地构建了pPICZαA-HE4表达载体，并获得2株鼠抗人HFA杂交瘤，其所分泌的抗体能特异地识别HFA蛋白。

关 键 词：卵巢癌 HE4 活体电穿孔 DNA免疫 杂交瘤 单克隆抗体 

分 类 号：Q813.2[生物学—生物工程]