人肿瘤坏死因子α基因穿梭表达载体的构建和在鱼腥藻7120中的表达  

作　　者：刘凤龙[1] 张宏斌[2] 施定基[1] 商之狄 林晨[3] 邵宁[1] 彭国宏[4] 张雪艳[3] 张海霞[4] 吴锦银[2] 王捷[2] 徐旭东[1] 江悦华[2] 钟泽璞[1] 赵树进[2] 吴旻[3] 曾呈奎[4] 

机构地区：[1]中国科学院植物研究所,北京100093 [2]广州军区广州总医院医学实验科,广州510010 [3]中国医学科学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室,北京100021 [4]中国科学院海洋研究所实验海洋生物学开放实验室,青岛266071

出　　处：《中国科学（C辑）》1999年第2期217-224,共8页Science in China(Series C)

基　　金：国家自然科学基金!资助项目 (批准号 :392 80 0 1 6)

摘　　要：报道了人肿瘤坏死因子α(hTNFα)基因穿梭表达载体的构建及其在丝状体蓝藻鱼腥藻 712 0中的表达和鉴定结果 .将质粒pRL rhTNF上hTNFα的cDNA连于pRL 43 9质粒上的PpsbA启动子下游 ,得到中间载体pRL TC .进一步与穿梭质粒pDC 8重组 ,得到可在大肠杆菌和蓝藻中均可表达的穿梭表达载体pDC TNF .pRL rhTNF ,pRL TC和pDC TNF三者在大肠杆菌中的表达量分别为 11.8% ,16 9%和 15 .0 % .通过三亲接合转移将pDC TNF引入鱼腥藻 712 0中并获稳定遗传的转基因株 .从转基因的鱼腥藻 712 0中检测到pDC TNF质粒的存在 ,且在和TNFα的cDNA探针进行的Southern杂交中呈阳性反应 .抽提转基因藻的蛋白样品进行检测 ,在Western印迹中和TNFα单克隆抗体呈阳性反应 .采用TNF对L92 9细胞的细胞毒性方法 ,证明转基因藻粗提液中 ,TNF确有细胞毒活性 .

关 键 词：肿瘤坏死因子 鱼腥藻 穿梭表达载体 基因表达 

分 类 号：R979.1[医药卫生—药品] R394.8[医药卫生—药学]