Nipah病毒一步法Real-time RT-PCR检测方法的建立  

Development of one step real-time RT-PCR method for detection of Nipah virus

作　　者：曾志磊[1,2,3] 谢鹏[1,2] 刘妍汐[1,2] 翟红[1,2] 朱丹[1,2] 彭丹[1,2] 陈晓[1,2] 

机构地区：[1]重庆医科大学附属第一医院神经内科,重庆400016 [2]重庆医科大学基础研究所,重庆400016 [3]郑州大学第二附属医院神经内科,河南郑州450014

出　　处：《中国微生态学杂志》2010年第7期655-657,共3页Chinese Journal of Microecology

基　　金："十一五"国家高技术研究发展计划(863计划)(2006AA02Z196)

摘　　要：目的建立针对Nipah病毒N基因的一步法Real-time RT-PCR检测方法,用于Nipah病毒感染样本的快速准确检测和定量。方法针对Nipah病毒的保守基因N设计引物和探针,建立一步法Real-time RT-PCR反应方法并分析敏感性和特异性。结果所设计的引物经Blast检索可以用于检测所有已知的Nipah病毒株。本研究建立的一步法Real-time RT-PCR方法可以特异性检测出Nipah病毒,不与Hendra病毒产生交叉反应。检测灵敏度为1.1×100～1.1×101copies/μl。标准曲线的线性范围为1.1×102～1.1×106copies/μl。结论本研究建立的一步法real-time RT-PCR方法敏感性和特异性较高,且不易出现污染引起的假阳性结果,适合用于Nipah病毒感染样本的检测。Objective To develop one step real-time RT-PCR（Taqman） assays of Nipah nucleoprotein so that Nipah virus RNA in field specimens or laboratory material can be characterized and quantitated rapidly specifically.Method A pair of specific oligonucleotide primers was designed.The linearity of the standard curve allowed quantification of 102 to 106 RNA transcripts/μl.Result The sensitivity of the test was close to 1～10 transcripts/μl.The assays were highly specific without cross-reaction with Hendra virus transcrips or other virus.Conclusion This standardized technique is sensitive and reliable and allows rapid detection and quantitation of Nipah RNA in both field and experimental materials used for the surveillance and specific diagnosis of Nipah virus.

关 键 词：NIPAH病毒 REAL-TIME RT-PCR 一步法 TAQMAN探针 快速检测 

分 类 号：R512.39[医药卫生—内科学]