人诱导性多能干细胞向神经干细胞分化的方法探讨  

Differentiation of human induced pluripotent stem cells into neural stem cells

作　　者：冯年花[1,2] 谢安[1] 娄远蕾[1] 阮琼芳[1] 郭菲[1] 杨阳[1] 潘长福[3] 邓志锋[3] 汪泱[1] 

机构地区：[1]南昌大学泌尿外科研究所,江西南昌330006 [2]南昌大学研究生院医学部,江西南昌330006 [3]南昌大学第二附属医院神经外科,江西南昌330006

出　　处：《中国病理生理杂志》2010年第8期1662-1664,共3页Chinese Journal of Pathophysiology

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.30960385);国家科技支撑计划资助项目(No.2008BAI68B06)

摘　　要：目的:探讨人诱导性多能干细胞(iPS细胞)体外定向分化为神经干细胞(NSCs)的方法。方法:人iPS细胞悬浮培养4 d形成的拟胚体(EB)经维甲酸(RA)诱导4 d,诱导后的EB在无血清培养基中筛选并扩增培养。倒置显微镜下观察诱导后细胞的形态变化,RT-PCR检测iPS细胞多能性基因Nanog、Oct4和Sox2的表达,免疫荧光法检测NSCs特异性标志物Nestin、神经元标志物β-tubulinⅢ和神经胶质细胞标志物GFAP的表达。结果:(1)人iPS细胞在饲养层细胞上稳定传代,表达多能性基因Nanog、Oct4和Sox2,去除饲养层后悬浮培养能形成球形EB;(2)经RA诱导后的EB在无血清培养基中筛选培养第1 d贴壁生长,周围爬出细胞;第3 d,在高倍镜下可见中央聚集的细胞呈环形的rosette结构,rosette结构增多到第7 d达高峰。对照组未观察到rosette结构。随后大部分rosette细胞脱离瓶壁悬浮生长,形成神经球样克隆。免疫荧光显示神经球呈nestin阳性表达。贴壁培养的神经球能分化成β-tubulinШ和GFAP阳性细胞。结论:RA诱导结合无血清培养基筛选法能诱导iPS细胞高效分化为NSCs。

关 键 词：诱导性多能干细胞 神经干细胞 维甲酸 人类 

分 类 号：Q813[生物学—生物工程] R318[医药卫生—生物医学工程]