人脑组织中STUB1基因的克隆构建及表达  

作　　者：赵虹[1,2] 刘惠敏[1] 徐万海[1] 张惊宇[1] 杨子超[1] 赵庆杰[2] 

机构地区：[1]哈尔滨医科大学第四医院神经内科,黑龙江哈尔滨150001 [2]哈尔滨医科大学第一医院神经内科,黑龙江哈尔滨150001

出　　处：《南方医科大学学报》2010年第8期1979-1981,共3页Journal of Southern Medical University

基　　金：黑龙江省自然科学基金(D200980)

摘　　要：目的构建人STUB1基因全长cDNA的真核表达载体DNA3.1-STUB1,观察STUB1基因在人脑胶质瘤细胞(U251细胞)中的表达。方法 RT-PCR技术扩增获得人脑组织STUB1基因全长cDNA,将扩增的产物进行TA克隆,经酶切、DNA测序鉴定正确,将STUB1基因酶切后构成pcDNA3.1-STUB1的真核表达重组质粒。用脂质体将重组质粒转染入U251胶质瘤细胞系,48h以后通过Westernblotting实验观察重组质粒的表达情况。结果 RT-PCR扩增获得人脑组织中STUB1cDNA全长912bp,构建完成真核表达重组质粒pcDNA3.1-STUB1,经DNA测序与GenBank中的人STUB1cDNA序列一致。经neomycin(neo)筛选获得稳定表达重组质粒的单克隆细胞株后,经过Westernblotting显示转染重组质粒的细胞中有高水平的STUB1基因表达。结论成功构建了pcDNA3.1-STUB1真核表达质粒,并发现其在U251细胞中过量表达,为进一步研究STUB1基因在胶质瘤发生发展中的作用奠定了基础。

关 键 词：脑胶质瘤 STUB1基因 基因表达 重组质粒 

分 类 号：R346[医药卫生—基础医学]