黄曲酶尿酸氧化酶突变体的构建、表达、纯化及生物学活性分析  

Construction, expression, purification and characterization of mutant of Aspergillus flavus urate oxidase

作　　者：张金龙[1] 任军[1] 李冰[1] 刘树玲[1] 侯利华[1] 付玲[1] 李建民[1] 陈薇[1] 

机构地区：[1]军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室,北京100071

出　　处：《生物工程学报》2010年第8期1102-1107,共6页Chinese Journal of Biotechnology

摘　　要：采用融合PCR的方法将黄曲霉尿酸氧化酶（uox）基因的307-309bp的TGC（Cys）突变为GCC（Ala），将所获得的突变体基因克隆到原核表达质粒pET-42a（＋）后转化大肠杆菌BL21（DE3）。经IPTG诱导，突变体蛋白（UOX—Ala^103）得到高水平的可溶性表达，目的蛋白占总蛋白含量的45％。疏水柱及阴离子柱纯化后，UOX-Ala^103蛋白纯度〉98％。Western blotting分析证实UOX—Ala加。能与抗UOX单抗特异结合。与天然型相比较，其体外生物学活性增加约60％，在高尿酸血症小鼠模型体内也有良好的降解尿酸的活性。We converted the TGC codon （307-309 bp） ofAspergillusflavus urate oxidase （UOX） gene to a GCC codon by using fusion PCR techniques to produce a C103A mutant. This gene was cloned into expression vector pET-42a （＋） and then transformed into Escherichia coli BL21 （DE3）. The mutant protein （UOX-Ala^103） was expressed in soluble form at high levels after induction with IPTG The expressed rUOX-Ala^103 accounted for about 45% of total bacterial proteins, rUOX-Ala^103 of up to 98% purity was obtained after purified using hydrophobic interaction and anion exchange. Western blotting showed that the anti-UOX antibody specifically recognized rUOX-Ala^103. The mutant protein showed a 60% increased in vitro biological activities compared with native protein, and performed a good activity of degrading the uric acid in vivo.

关 键 词：黄曲霉尿酸氧化酶 突变体 半胱氨酸 表达 纯化 生物活性 

分 类 号：Q814[生物学—生物工程]