ggpps 5'-侧翼序列的克隆及其启动子功能验证  

Cloning and Functional Verification on Promoterof the ggpps 5'Flanking Sequence

作　　者：郭佳玉[1,2] 李佟清[1,2] 李书涛[1,2] 张鹏[1,2] 付春华[1,2] 余龙江[1,2] 

机构地区：[1]华中科技大学生命科学与技术学院资源生物学与生物技术研究所,湖北武汉430074 [2]华中科技大学生命科学与技术学院分子生物物理教育部重点实验室,湖北武汉430074

出　　处：《现代生物医学进展》2010年第16期3001-3003,共3页Progress in Modern Biomedicine

基　　金：国家自然科学基金(NSFC20776058);2006年教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET-06-0646)

摘　　要：目的:研究牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶(geranylgeranyl diphosphate synthase,GGPPs)基因启动子的活性;方法:从曼地亚红豆杉细胞中克隆ggpps基因5'-侧翼序列,并将该侧翼序列代替pBI121质粒上的CaMV35S启动子,以Gus基因作为报告基因构建植物表达载体,并进一步导入农杆菌LBA4404中获得阳性转化子,然后用叶盘转化法验证该侧翼序列的启动子活性;结果:本研究从曼地亚红豆杉细胞中成功克隆了ggpps基因的5'-侧翼序列,并且验证了该侧翼序列具有启动子活性;结论:ggpps基因的5'-侧翼序列的测序结果表明本实验成功克隆了该侧翼序列,启动子功能验证结果表明ggpps5'-侧翼序列具有启动子活性,这些结果为进一步的通过缺失法进行ggpps基因启动子功能研究奠定了基础。Objective： In this study, the 5′-flanking sequence of the geranylgeranyl diphosphate synthase （GGPPs） gene from Taxus x media was cloned and pBI121-gps-Gus expression vector was constructed by replacing the CaMV35S promoter in the expression vector pBI121 with ggpps 5′-flanking sequence using Gus as the reporter gene. The ggpps 5′-flanking sequence was confirmed to have promoter activity by transient expression in the tobacco （Nicotiana tabacum L. cv. NC89） leaves with Agrobacterium- mediated transformation.The results lay a foundation for the study of the ggpps promoter.

关 键 词：紫杉醇 栊牛儿基栊牛儿基焦磷酸合成酶 5′-侧翼序列 启动子活性 

分 类 号：Q342.3[生物学—遗传学] Q75