bFGF基因体外转染缺血性心肌病患者骨髓基质干细胞研究  

作　　者：刘效波[1] 张海宁[2] 赵晓华[1] 

机构地区：[1]潍坊医学院附属医院胸心外科,山东潍坊261031 [2]青岛大学医学院附属医院,山东青岛266003

出　　处：《医学信息（中旬刊）》2010年第9期2378-2379,共2页Medical Information Operations Sciences Fascicule

摘　　要：目的:用Lipofectamine转染试剂介导,将重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-bFGF转染体外培养的缺血性心肌病患者骨髓基质干细胞,检测转染效果及目的基因的表达情况。材料与方法:抽取临床确诊缺血性心肌病患者髂嵴骨髓,贴壁分离法接种培养骨髓基质干细胞。绘制生长曲线。MTT比色法检测细胞活力。取第二代细胞,使用Lipofectamine转染试剂,将重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-bFGF转染骨髓基质干细胞,转染后4h、12h、24h、48h、72h以及传代后分别用倒置荧光显微镜观察标志基因增强绿荧光蛋白的表达效率及荧光强度的变化,计算转染效率。取各观察时间点的培养上清液,酶联免疫吸附试验检测其中bFGF的浓度。转染细胞爬片行bFGF免疫组化染色检测bFGF的表达。结果:缺血性心肌病患者基质干细胞在接种后24小时开始贴壁,伸展成长梭形。MTT比色法测细胞活力达96%。在不同时间点观测EGFP表达情况,发现在转染后4h即有细胞表达绿色荧光蛋白,荧光强度和表达细胞总数在48h达高峰,72h时可见部分细胞荧光强度下降,传代后仍可观察到EGFP的表达。ELISA检测不同时间点转染上清液中分泌的bFGF浓度,结果在4h-48h内浓度呈渐进上升的趋势,在48h最高可达23.5ng/ml。转染后的部分细胞形态发生变化。转染细胞爬片行bFGF免疫组化染色证实在胞浆中有bFGF颗粒着色阳性。结论:使用Lipofectamine转染试剂可有效地转染体外培养的缺血性心肌病患者骨髓基质干细胞。转染后的培养上清可在较长时间内检测到较高浓度的bFGF的分泌。bFGF基因转染可促进骨髓基质干细胞的增殖、分化。

关 键 词：基质干细胞 碱性成纤维细胞生长因子 缺血性心肌病 转染 

分 类 号：R318[医药卫生—生物医学工程]