华中五味子ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选  

Optimization of ISSR-PCR Reaction System and Primers Screening in Schisandra sphenanthera

作　　者：罗成[1] 熊宇婷[1] 顾蔚[1,2,3] 王喆之[1,2,3] 

机构地区：[1]陕西师范大学生命科学学院,西安710062 [2]陕西师范大学药用资源与天然药物化学教育部重点实验室,西安710062 [3]西北濒危药材资源开发国家工程实验室,西安710062

出　　处：《植物研究》2010年第5期588-593,共6页Bulletin of Botanical Research

基　　金：国家"十一五"科技支撑计划项目(2006BAI06A13-06);陕西师范大学2009年研究生培养创新基金项目(2009CXS032)

摘　　要：系统研究了华中五味子ISSR-PCR反应体系中的主要影响因子,确立华中五味子ISSR-PCR最适反应体系,并筛选出12条有效引物。单因子实验结果显示,华中五味子ISSR-PCR反应体系中各主要成分的适宜浓度范围为,Mg^2＋1.503.50 mmol.L^-1,dNTPs 0.100.35 mmol.L^-1,引物0.250.60μmol.L^-1,Taq酶0.501.50U。4因子3水平正交实验确立了最适反应体系,即20μL体系中包含2.50 mmol.L-1Mg2＋、0.20 mmol.L^-1dNTPs、0.25μmol.L^-1引物、1.50 UTaq酶、60 ng DNA模板、2.50μL 10×PCR Buffer。本研究为华中五味子种质资源的评估及遗传多样性分析奠定基础。The main influential factors of ISSR-PCR reaction system in Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.were systematically studied,optimization of ISSR-PCR system was established,and 12 effective ISSR primers were selected.Single-factor experimental results showed that the suitable concentration of composition of ISSR-PCR systen was 1.503.50 mmol·L-1 of Mg2＋,0.100.35 mmol·L-1 of dNTPs,0.250.60 μmol·L-1 of primer and 0.501.50 U of Taq DNA polymerase,respectively.The optimal ISSR-PCR reaction system was defined by orthogonal experiment with four-factor of three-level,i.e.20 μL reaction system contained 2.50 mmol·L-1 of Mg2＋,0.20 mmol·L-1 of dNTPs,0.25 μmol·L-1 of primer,1.50 U of Taq DNA polymerase,60 ng of DNA template,2.50 μL of 10×PCR Buffer.The present study could be used in the research for evaluation of germplasm resources and analysis of genetic diversity in S.sphenanthera Rehd.et Wils..

关 键 词：华中五味子 ISSR 体系优化 引物筛选 

分 类 号：S567.2[农业科学—中草药栽培]