RNA干扰隐球菌cap10基因的siRNA表达载体的构建与鉴定  

作　　者：肖玉鹏 苏晓霁[2] 江凌[2] 程祖建[2] 欧启水[2] 

机构地区：[1]莆田市第一医院检验科,福建莆田351100 [2]福建医科大学附属第一医院检验科,福州350005

出　　处：《临床检验杂志》2010年第5期358-359,共2页Chinese Journal of Clinical Laboratory Science

基　　金：福建省自然科学基金项目(2008J0081);福建省教育厅科技计划项目(JA07086)

摘　　要：目的构建cap10基因RNA干扰(RNAi)的小干扰RNA(siRNA)表达载体,为将其应用于隐球菌的改造及隐球菌性脑膜炎的生物治疗奠定基础。方法根据GenBank发表的cap10基因序列,按照干扰模板设计原则,选择设计1条可形成发夹结构的核苷酸序列,克隆连接到空载体psilencer4.1-CMVneo中构建重组质粒ps4.1neo-cap10并测序鉴定。用LiAc化学法将重组质粒转染新生隐球菌细胞并用G418筛选。比较重组质粒转染前后新生隐球菌cap10基因表达量的变化。结果成功构建针对cap10基因的ps4.1neo-cap10,经测序证实符合预期设计;ps4.1neo-cap10转染组新生隐球菌内cap10基因表达(175534.6±47004.3)copies/μl明显低于空质粒转染组(321995.5±32611.8)copies/μl和空白组(562931.7±65928.4)copies/μl,P<0.05。结论成功构建cap10基因的shRNA表达载体,其可以明显抑制新生隐球菌细胞内cap10基因的表达。

关 键 词：新生隐球菌 cap10 RNA干扰 

分 类 号：Q949.331.4[生物学—植物学]