大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pBCG-2100的构建及应用  

作　　者：程继忠[1,2] 郑波[1,2] 海涛 皇甫永穆[1,2] 

机构地区：[1]同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物学研究室 [2]同济医科大学职业医学研究所

出　　处：《生物工程学报》1999年第2期225-229,共5页Chinese Journal of Biotechnology

基　　金：总理基金;国家自然科学基金

摘　　要：利用分子生物学方法，构建了大肠杆菌分枝杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）穿梭表达质粒ｐＢＣＧ２１００，研究了编码日本血吸虫中国大陆株谷胱甘肽Ｓ转移酶（ＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＧＳＴ）抗原基因在卡介苗（ＢａｃｉｌｕｓＣａｌｍｅｔｅＧｕｅｒｉｎ，ＢＣＧ）中的表达。以含人结核杆菌热休克蛋白（Ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎ，ｈｓｐ）７０基因全长序列的质粒ｐＭＴ７０为模板，扩增出ｈｓｐ７０启动子，测序选出无错配的启动子，将其定向克隆入Ｅ．ｃｏｌｉＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ穿梭质粒ｐＢＣＧ２０００中，构建成Ｅ．ｃｏｌｉＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ穿梭表达质粒ｐＢＣＧ２１００。再将编码ＧＳＴ的ｃＤＮＡ按正确的阅读框顺序，克隆到ｐＢＣＧ２１００中ｈｓｐ７０启动子的下游，得到分枝杆菌表达质粒ｐＢＣＧＧＳＴ。将ｐＢＣＧＧＳＴ电转化入ＢＣＧ中，筛选出重组ＢＣＧ疫苗，经热诱导后所表达的重组ＧＳＴ（ｒＧＳＴ）抗原，为可溶性蛋白，经纯化后，在ＳＤＳＰＡＧＥ上分子量为２６ｋＤ处可见明显的表达蛋白带，其表达量占ＢＣＧ菌体总蛋白的１３％。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ提示ｒＧＳＴ能与?

关 键 词：穿梭表达质粒 GST 基因表达 纯化 卡介苗 

分 类 号：R378.91[医药卫生—病原生物学] Q784[医药卫生—基础医学]