猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白在重组牛痘病毒中的表达与鉴定  

Construction of recombinant vaccinia virus expressing porcine reproductive and respiratory syndrome virus M protein

作　　者：张维军[1] 田野[1] 林燕[1] 王群[1] 徐青元[1] 孙庆歌[1] 刘霓红[1] 杨涛[1] 田志军[1] 步志高[1] 童光志[2] 李文京[3] 吴东来[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部兽医公共卫生重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001 [2]中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241 [3]中国动物疫病预防控制中心,北京100125

出　　处：《中国预防兽医学报》2010年第10期741-746,共6页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

基　　金：国家863计划(2006AA10A203);黑龙江省自然科学基金重点项目(ZJN-0602-01)

摘　　要：为重组表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)M蛋白,本研究将RT-PCR获得的PRRSV CH-1a株M蛋白基因,克隆于pMD18-T载体中,经测序鉴定正确后,亚克隆至牛痘病毒重组转移质粒pSC11中,构建了转移重组质粒pSC11-PRRSV-M。将pSC11-PRRSV-M在脂质体的介导下转染WR株牛痘病毒感染的TK-143细胞,在含有X-gal的琼脂培养基上通过蓝斑筛选含有PRRSV M基因的重组病毒rWR-PRRSV-M。Western blot与IFA检测表明,重组病毒成功表达了PRRSV M蛋白,而且所表达的蛋白保持了良好的免疫原性。动物实验表明,rWR-PRRSV-M所表达的PRRSV M蛋白在免疫小鼠体内诱生了抗PRRSV的抗体。rWR-PRRSV-M的构建,为进一步探讨PRRSV M蛋白免疫原性提供了基础数据,也为PRRS重组活载体疫苗的研究奠定了基础。In this study,the M gene of Porcine reproductive and respiratory syndrome virus（PRRSV） CH-1a strain was amplified from the PRRSV genome by RT-PCR and cloned into the plasmid pSC11.The recombinant plasmid pSC11-PRRSV-M was transfected into TK-143 cells infected with vaccinia virus WR strain.Recombinants vaccinia virus of rWR-PRRSV-M was obtained by selecting blue plaques on the TK-143 cells overlaid with agar containing X-gal,and confirmed by PCR.The M gene expressed in TK-143 cells were identified by SDS-PAGE and confirmed by immunofluorescence assay（IFA）.The rWR-PRRSV-M recombinant virus could induce specific humoral immune responses against PRRSV in the immunized mice.

关 键 词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 M蛋白 重组牛痘病毒 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学]