重组人载脂蛋白AⅠ的原核表达及活性检测初探  

作　　者：卞炯[1] 何毅明[1] 祝慈芳[1] 王黎[1] 吴玮[1] 朱威[1] 

机构地区：[1]上海生物制品研究所,上海200052

出　　处：《中国输血杂志》2010年第10期793-798,共6页Chinese Journal of Blood Transfusion

摘　　要：目的原核表达人载脂蛋白AⅠ(ApoAⅠ),对其表达进行优化,同时对ApoAⅠ活性检测方法进行初步研究。方法通过构建3种不同的重组质粒来研究以组氨酸(His)6融合蛋白表达、(His)6-pro(前肽)融合蛋白与单目的基因表达之间的差别,其中(His)6-pro-ApoAⅠ质粒中目的基因第3、4、7位密码子进行无义突变。随后采用镍离子柱纯化重组蛋白,间接法测定ApoAⅠ对被内毒素(LPS)攻击的细胞的保护效果来检测其生物活性。结果单目的基因(pET28a-ApoAⅠ)、组氨酸标记的融合蛋白(pET28a-(His)6-ApoAⅠ)以及(His)6-pro(前肽)融合蛋白(pET28a-(His)6-pro-ApoAⅠ)表达量分别为17、40、95mg/L,经镍柱纯化后的重组蛋白经Western blot、分子筛层析以及生物活性检测,表明原核表达的ApoAⅠ为单体蛋白且具有相应的生物学活性。结论原核表达的ApoAⅠ与人血浆提纯的天然ApoAⅠ分子生物性状无明显差异。

关 键 词：重组ApoAⅠ 原核表达 蛋白纯化 生物活性 

分 类 号：R457[医药卫生—治疗学]