产harpin的成团泛菌工程菌的构建  

CONSTRUCTION OF A RECOMBINANT STRAIN OF Pantoea agglomerans CAPABLE OF PRODUCING HARPIN Ea

作　　者：赵立平[1] 申泉 李艳琴[1] 宁红秀 张晋丹 董汉松[2,2] 徐文联[3] 段明星[3] 

机构地区：[1]山西大学生物工程实验室,太原030006 [2]山东农业大学植保系 [3]清华大学生命科学与技术系,北京100084

出　　处：《植物病理学报》1999年第2期142-146,共5页Acta Phytopathologica Sinica

基　　金：国家"863"生物技术计划基金;国家教委"资助优秀青年教师基金";山西省留学基金

摘　　要：梨火疫病菌（ Ｅｒｗｉｎｉａ ａｍｙｌｏｖｏｒａ） 产生的胞外蛋白ｈａｒｐｉｎ 是引发其非寄主植物过敏反应的因子。ｈａｒｐｉｎ 蛋白还具有诱导植物抗性的功能。成团泛菌（ Ｐａｎｔｏｅａ ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）３０８Ｒ 对链格胞属（ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ） 的真菌具有拮抗活性，是一株抗利福霉素的自发突变株，对壮观霉素敏感。本文通过电击转化法将带有梨火疫病菌ｈｒｐ 基因簇的重组质粒ｐＣＰＰ４３０ 导入３０８Ｒ。所得转化子具有ｐＣＰＰ４３０ 的壮观霉素抗药性标记，在番茄上引起过敏反应；从转化子中提取到与ｐＣＰＰ４３０ 大小一样的质粒，其酶切物理图谱也与ｐＣＰＰ４３０ 完全相同；用地高辛标记的ｈａｒｐｉｎ 的结构基因ｈｒｐＮ 为探针对转化子中的质粒进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 分析，结果在转化子中得到信号明显的杂交片段，而受体菌３０８Ｒ 中未出现杂交信号；提取细菌的外壁的蛋白质进行ＰＡＧＥ 分析，在大约４４ ｋｄ 的位置上３０８Ｒ（ｐＣＰＰ４３０） 比３０８Ｒ 明显多出１ 条带。这些结果表明成团泛菌能够表达梨火疫病菌的ｈｒｐ 基因簇，所产ｈａｒｐｉｎThe recombinant cosmid pCPP430 harboring the hrp gene cluster of Erwinia amylovora was transformed via electroporation into Pantoea agglomerans strain 308R, an epiphyte isolated from tomato. Transformants induced hypersensitive response when infiltrated into leaves of tomato plants. A plasmid of ca 50 kb size was isolated from one of the transfor mant and shown to have same physical map of that of pCPP430. Southern blotting of this plasmid DNA with Dig labeled hrpN DNA as probe revealed the presence of hrpN in the transformant. PAGE of cell envelop associated proteins of the transformant showed an additional band at 44 kd position to that of the recipient CK. Thus, bioassay and molecular evidences all demonstrated the successful construction of a recombinant strain of Pantoea agglomerans that was capable of producing harpin Ea .

关 键 词：成团泛菌 HARPIN 工程菌 植物过敏反应 

分 类 号：Q939.1[生物学—微生物学] S432.42[农业科学—植物病理学]