传染性法氏囊病病毒抗原表位与乙型肝炎病毒核心抗原嵌合基因的构建及其表达产物分析  

Molecular design and immunogenic analysis for the IBDV mimotope and HBcAg chimera

作　　者：刘小娟[1,2] 王永山[1] 欧阳伟[1] 张海彬[2] 王忠灿[3] 唐雨德[3] 

机构地区：[1]江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014 [2]南京农业大学动物医学院,江苏南京210095 [3]南京军区军事医学研究所,江苏南京210002

出　　处：《中国预防兽医学报》2010年第11期879-883,共5页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30571371);江苏省自然科学基金资助项目(BK2008065;BK2008352;BK2009041)

摘　　要：为提高传染性法氏囊病病毒(IBDV)多表位基因5epis的免疫效力,本研究应用重叠延伸PCR技术,在乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)基因的231位～232位核苷酸(77位～78位氨基酸残基)之间插入BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点,构建基于HBcAg修饰基因(mHBc)的抗原表位嵌合体基因分子载体pET-mHBc。将编码IBDV多表位基因5epis定向插入到pET-mHBc的mHBc基因中,获得嵌合体基因mHBc-5epis表达重组质粒pET-mHBc-5epis,并在大肠杆菌中表达。经SDS-PAGE分析,重组嵌合体蛋白的分子量约29 ku,表达量约占菌体总蛋白的47.6%;Western blot结果表明,重组嵌合体蛋白可与IBDV抗体反应形成1条特异性蛋白带;重组嵌合体蛋白呈病毒样颗粒(VLP),直径约100 nm～120 nm;用IBDV抗体夹心ELISA检测,抗原效价达到1∶200。本实验成功构建了5epis与HBcAg嵌合体基因,并在大肠杆菌中高效表达,具有IBDV抗原反应性的重组病毒样颗粒嵌合体蛋白,为研究其表位型基因工程疫苗提供了新途径。To enhance the immune efficacy of multi-mimotopes gene 5epis of infectious bursal disease virus（IBDV）,the multi-mimotopes gene 5epis was inserted into mHBc of pET28-mHBc expression vector by overlapping PCR.The recombinant plasmid pET-mHBc-5epis was transformed into E.coli BL21（DE3） and a chimeric mHBc-5epis protein was expressed by inducing with IPTG.SDS-PAGE showed that the expressed protein was approximately 29 ku and up to 47.6% of the total bacterial proteins.Western blot confirmed that the recombinant protein could be recognized by anti-IBDV polyclonal antibody.In addition,self-assembled virus-like particles（VLP） with a diameter of 60 nm to 80 nm was observed under electron microscopy in the bacterial lysate.The recombinant mimotope-based chimeric construction reported here could be used as an effective strategy for

关 键 词：传染性法氏囊病病毒 抗原表位 乙肝病毒核心抗原(HBcAg) 嵌合体 

分 类 号：S852.6[农业科学—基础兽医学]