牛分枝杆菌mpb51-63融合基因的克隆及其原核表达  

Cloning and prokaryotic expression of Mycobacterium bovis mpb51-63 fusion gene

作　　者：李璐璐[1] 王春芳[1,2] 任飞[1] 刘新宇[1] 宁浩然[1] 刘磊[3] 李冰洁[1] 姜秀云[3,2] 何昭阳[1] 

机构地区：[1]吉林农业大学动物科技学院,吉林长春130118 [2]教育部动物生产及产品质量安全重点实验室,吉林长春130118 [3]吉林农业大学生命科学学院,吉林长春130118

出　　处：《中国预防兽医学报》2010年第11期898-900,共3页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30972190);吉林省科技发展计划资助项目(20070569)

摘　　要：为提高牛分枝杆菌(M.bovis)单一抗原的抗原性,本研究以重叠延伸拼接PCR技术将M.bovis mpb51与mpb63基因连接,并克隆至pMD18-T中,构建重组质粒pMD-51-63。以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pMD-51-63和pET28a(+),将纯化的mpb51-63融合基因亚克隆至pET28a(+)中,获得了重组表达质粒pET-51-63。该重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,表达约46 ku的外源融合蛋白,免疫印迹实验证实,该融合蛋白具有M.bovis的抗原反应性。为进一步研究mpb51-63融合基因及其表达产物作为牛结核病亚单位疫苗、核酸疫苗以及特异的诊断试剂奠定了基础。In this study,a fusion gene of mpb51 and mpb63 of Mycobacterium bovis was constructed by the method of splicing by overlapping extension（SOE） PCR.The fusion gene mpb51-63 were cloned into the prokaryotic expression vector pET28a（＋）,transformed into competence Escherichia coli BL21（DE3） and expressed by inducing with IPTG.SDS-PAGE analysis showed that the fusion protein was approximately 46 ku.Western blot confirmed that the fusion protein retained the antigenic activity of M.bovis.This study could serve as a basis for the development of subunit vaccine,DNA vaccine and diagnostic antigen for bovine tuberculosis.

关 键 词：牛分枝杆菌 mpb51-63融合基因 克隆 原核表达 

分 类 号：Q786[生物学—分子生物学] S855.2[农业科学—临床兽医学]