猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州分离株ORF5基因的克隆及其表达载体的构建  

作　　者：刘霞[1] 汤德元[1] 黄涛[1] 徐健[1] 王彬[1] 

机构地区：[1]贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025

出　　处：《黑龙江畜牧兽医》2010年第2期102-104,共3页Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine

基　　金：贵州省贵阳市2005年畜牧科技专项基金项目((2005)筑科农字第4-11号);2007年贵州省科技厅基金项目(黔科合J字(2007)2068号)

摘　　要：为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州分离株ORF5基因的表达,研究参照GenBank上发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州分离株(PRRSV Guizhou-1)的核苷酸序列,利用DNASTAR、Oligo6.0和Primer Premier5.0软件设计1对ORF5基因的特异性引物,同时将贵州大学动物科学学院分子生物学实验室分离、保存的PRRSV Guizhou-1接种于Marc-145细胞,产生明显细胞病变后收集病毒,用Trizol法提取总RNA进行RT-PCR扩增后获得目的基因,并将其克隆于质粒pMD18-T载体后转入大肠杆菌Top10细胞中,然后分别克隆于原核表达载体pET-32a(+)和真核表达载体pcD-NA3.1(+)中,再进行抗性筛选、酶切鉴定和序列测定。结果表明:得到含有目的基因的阳性克隆,成功构建了猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州分离株ORF5基因原核表达载体pET-ORF5及真核表达载体pcDNA-ORF5。

关 键 词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 贵州分离株 ORF5基因 克隆 表达载体 构建 

分 类 号：S852.659.6[农业科学—基础兽医学]