EGF和受体FLT-1、FLK-1在大肠癌中的表达及siRNA沉默VEGF基因对大肠癌细胞系Caco-2、HT29、HCT116生物学特性的影响  

作　　者：吴文清[1] 张洪福[1] 

机构地区：[1]安徽医科大学基础医学院

出　　处：《安徽医科大学学报》2010年第6期836-836,共1页Acta Universitatis Medicinalis Anhui

摘　　要：目的研究VEGF和受体FLT-1、FLK-1在大肠癌组织中的表达和临床病理因素之间的关系;观察siRNA干扰VEGF基因对不同分化人大肠癌细胞系生物学特性的影响。方法应用免疫组织化学S-P法,检测82例大肠癌及14例大肠正常黏膜组织中VEGF和FLT-1、FLK-1的表达,分析大肠癌组织中FLT-1、FLK-1的表达与大肠癌临床病理参数之间的关系;以脂质体lip-2000为载体,用针对VEGF特异靶点的siRNA转染入3种不同分化人大肠癌细胞系Caco-2、HT29、HCT116后,免疫细胞化学S-P法、WesternBlot检测VEGF蛋白表达变化,MTT法检测对细胞增殖的影响;流式细胞技术检测细胞凋亡。结果①大肠癌组织VEGF和受体FLT-1、FLK-1阳性表达率显著高于正常大肠组织(P<0.05)。VEGF的表达在有无淋巴结转移组和不同的Duke分期中亦有显著差异(P<0.05)。FLT-1和FLK-1在大肠癌组织的阳性表达呈显著正相关,(r=0.457,P<0.05)。②VEGF-siRNA转染Caco-2、HT29、HCT116细胞后,免疫细胞化学结果显示:3种大肠癌细胞系的正常对照组,脂质体对照组及阴性错配对照组VEGF表达均呈深棕黄色强阳性表达,3组无明显差别;转染VEGF-siRNA组阳性细胞数均无明显减少,阳性细胞细胞浆呈浅棕黄色弱阳性表达。Westernblot结果显示:Caco-2、HT29、HCT116细胞VEGF-siRNA组细胞的蛋白条带亮度均明显低于正常对照组、脂质体对照组和阴性错配对照组,3种细胞的VEGF-siRNA组VEGF蛋白表达均较对照组明显下降。③MTT检测结果:与阴性对照组相比,3种细胞的VEGF-siRNA组细胞生长出现明显的抑制(P<0.05)。同一种细胞系VEGF-siRNA组中,不同时段(24h、48h、72h)肿瘤细胞增殖抑制率之间差异有统计学意义(P<0.05),且随着作用时间的增加,抑制率呈上升趋势,表明细胞生长抑制率在一定剂量范围内随时间的增加而增加,具有时间依赖性。同一时间阶段不同细胞(Caco-2、HT29、HCT116)的VEGF-siRNA组的抑制率之间差异有�

关 键 词：HCT116细胞 受体FLT-1 siRNA干扰 大肠癌细胞系 VEGF基因 CACO-2 FLK-1 HT29 

分 类 号：R971.1[医药卫生—药品]