抗GRP78单克隆抗体的制备及初步鉴定  

作　　者：高慧萍[1] 俞菁 余君铭[1] 孔洁[1] 张翠珍[1] 王华茂[1] 龚波 

机构地区：[1]上海市肿瘤研究所癌基因与相关基因国家重点实验室,上海200032 [2]长宁区妇幼保健院,上海200051

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2010年第12期1229-1231,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：上海市科委资助项目(08411966800)

摘　　要：目的:原核表达GRP78并制备抗GRP78的特异性单克隆抗体(mAb),并初步鉴定相应mAb的特性。方法:从肺癌患者组织中抽提总RNA,RT-PCR获得grp78全长基因,并通过原核重组表达GRP78蛋白;以纯化的GRP78蛋白免疫BALB/c小鼠,成功免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤Sp2/0细胞融合,筛选得到分泌特异性抗GRP78的mAb的杂交瘤细胞株;并通过Western blot及免疫组化初步鉴定其特异性。结果:成功构建重组表达质粒PET-28a-grp78并由大肠杆菌表达获得GRP78蛋白,被该蛋白免疫的BALB/c小鼠与Sp2/0细胞融合、筛选,获得3株稳定分泌抗GRP78抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2A1、4B8和4A12。采用其中1株4A12 mAb对3个肺癌患者组织样本进行Western blot检测以及免疫组化分析,结果均显示4A12 mAb能够特异识别肺癌组织表达的GRP78。结论:成功制备了抗GRP78的mAb,并能够特异识别肺癌组织表达的GRP78,为进一步研究GRP78在肿瘤治疗中的作用提供基础。

关 键 词：GRP78 杂交瘤 单克隆抗体 

分 类 号：Q813.2[生物学—生物工程]