携带人ILT-3基因重组慢病毒载体的构建与鉴定  

作　　者：葛冠群[1] 田普训[1] 贾利宁[1] 丁晨光[1] 靳占魁[1] 薛武军[1] 丁小明[1] 

机构地区：[1]西安交通大学第一附属医院肾病中心肾移植科,陕西西安710061

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2010年第12期1306-1307,共2页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30872578)

摘　　要：目的:构建携带人ILT3基因重组慢病毒载体并检测其生物学功能。方法:从已构建好的含ILT3的质粒pB lue-scriptR-ILT3为模板,利用聚合酶链反应(PCR)方法扩增目的基因ILT3;将该基因与慢病毒载体表达质粒pLVX-AcGFP-N1连接,得到重组的pLVX-AcGFP-ILT3,通过酶切和测序分析比对验证ILT3基因后,将pLVX-AcGFP-ILT3质粒利用慢病毒转染系统转染人胚胎肾上皮细胞株Lenti-X 293T细胞获得携带ILT3慢病毒载体;转染人脐静脉血管内皮细胞,利用流式细胞仪检测目的基因ILT3的表达。结果:经PCR扩增获得1 844 bp的目的基因片段,构建的重组质粒经酶切及测序和分析比对鉴定正确;该质粒与包装质粒共转染293T细胞获取的慢病毒,纯化、浓缩后滴度达5×1012转导单位pfu/L;转染的HUVECs,流式细胞检测ILT3阳性率为98%,可判断目的基因ILT3在靶细胞HUVECs中表达。结论:成功构建转载质粒pLVX-AcGFP-ILT3及携带ILT3基因慢病毒载体。

关 键 词：ILT3 重组慢病毒载体 树突状细胞 

分 类 号：R392.11[医药卫生—免疫学]