α-突触核蛋白对N-甲基-D-天门冬氨酸所致细胞毒性作用的影响  

Effect of Alpha-synuclein on N-methyl-D-aspartic Acid-induced Cytotoxicity

作　　者：李昕[1] 程芙蓉[1] 李尧华[1] 王玉兰[2] 张燕莉[1] 于顺[1] 

机构地区：[1]首都医科大学宣武医院神经生物学研究室神经变性病教育部重点实验室 [2]首都医科大学宣武医院中心实验室

出　　处：《首都医科大学学报》2010年第6期726-731,共6页Journal of Capital Medical University

基　　金：国家高技术研究发展计划( 863计划)重大项目(2006AA02A408);国家重点基础研究发展计划(973计划)重大项目(2011CB504100);国家自然科学基金(30270482; 30271437; 30430280;81071014);北京市自然科学基金(7022011; 7102076);北京市属高等学校人才强教计划资助项目(PHR200907113)~~

摘　　要：目的研究α-突触核蛋白(α-Syn)对N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)引起的多巴胺能神经细胞毒性作用的影响。方法在MES23.5多巴胺能神经细胞建立NMDA细胞毒模型,MTS法检测细胞活力,AO/PI荧光标记以及免疫印记测定caspase-3表达检测细胞凋亡,细胞外添加α-Syn蛋白,观察α-Syn对NMDA所致细胞毒性作用的影响。结果 NMDA(5mmol/L)引起明显的细胞内Ca2+升高以及细胞毒性作用,表现为细胞活力下降、凋亡细胞增加以及caspase-3表达升高。NMDA的细胞毒性作用可被NMDA受体特异性阻断剂MK801阻断。预先用α-Syn(2.5μmol/L,5μmol/L,10μmol/L)处理细胞明显抑制NMDA引起的细胞内Ca2+升高以及细胞毒性作用,其作用随α-Syn浓度增高而增强。结论α-Syn对NMDA所致多巴胺能神经元的细胞毒性作用具有抑制作用,其机制可能与其抑制与NMDA引起的Ca2+内流以及caspase-3激活有关。Objective To investigate the effect of α-Synuclein（α-Syn） on N-methyl-D-aspartic acid（NMDA）-induced cytotoxicity.Methods NMDA cytotoxicity was produced on MES 23.5 dopaminergic cells.MTS cell viability assay,AO/PI fluorescent labeling of apoptotic cells,and western blot analysis of caspase-3 expression were used for assessment of the NMDA cytotoxicity.Confocal microscopy with Ca2＋ probe was applied for monitoring the change of intracellular Ca2＋ concentration.Results NMDA of 5 mmol/L triggered a significant increase of the cell death rate as revealed by decreased cell viability and increased apoptotic cells,which was blocked by a specific NMDA receptor antagonist MK801.In addition,NMDA induced significant increase in caspase-3 expression and intracellular Ca2＋ concentration.Pretreatment of the cells with α-Syn attenuated the NMDA-induced cell death,[Ca2＋]i up-regulation and caspase-3 increase.Conclusion α-Syn reduced NMDA-induced cytotoxicity through a mechanism of preventing caspase-3 activation and NMDA-induced Ca2＋ influx.

关 键 词：Α-突触核蛋白 MES23.5细胞 N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA) 细胞毒性 

分 类 号：Q189[生物学—神经生物学]