TTV1与TTV2 SYBR-Green I实时荧光PCR检测方法的建立和应用  

Development of a duplex SYBR GreenⅠreal-time PCR assay for detection of porcine Torque Teno virus genotype 1 and 2

作　　者：陈欣[1] 符芳[1] 王伟[2] 李雪松[1] 李海忠[1] 宋淑萍[1] 李曦[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨150001 [2]哈尔滨师范大学,黑龙江哈尔滨150001

出　　处：《中国预防兽医学报》2010年第12期948-951,共4页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

基　　金：黑龙江省自然基金重点项目(ZJN0503-02)

摘　　要：为建立输血性传播病毒(TTV)基因1型(TTV1)和TTV基因2型(TTV2)的检测方法,本研究根据TTV1与TTV2基因的非编码区域序列差异,设计了2对特异引物,建立了鉴别TTV1和TTV2的SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR方法。分别进行了特异性、敏感性及重复性检验,结果表明:重组质粒建立的标准曲线相关系数为99%;可以同时鉴别检测TTV1和TTV2,检测PCV2和PRRSV阳性样品均呈阴性,表明该方法具有良好的特异性;最低检出量为10 copies/μL;重复试验结果显示,TTV1组内和组间变异系数分别为0.14%和0.74%;TTV2组内和组间变异系数均为0.13%;检测现地采集的189份样品,TTV1阳性率32.3%,TTV2阳性率6.3%,TTV1和TTV2混合感染的阳性率28.6%。TTV检测方法的建立为猪群TTV病的流行病学调查提供了有效的手段。A duplex SYBR GreenⅠ real-time PCR was established using two pairs of primers designed according to the specific sequences at the UTR regions of porcine Torque Teno virus genotype 1 and 2（TTV1 and TTV2）.The assay could specifically detect the target cDNAs or DNA of TTV1 and TTV2,but not the classical stains of porcine reproductive and respiratory syndrome virus and porcine circovirus 2.The sensitivity of the assay was 10 copies/μL for TTV1 and TTV2.Tested on DNA preparations from 189 samples of pigs showed that the duplex real-time PCR detected 32.3% positive for TTV1,6.3% positive for TTV2 and 28.6% for co-infection of TTV1 and TTV2.

关 键 词：SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR TTV1 TTV2 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学]