仙茅随机扩增多态性DNA反应体系的优化  

Optimization of the RAPD Reaction System for Curculigo orchioides

作　　者：李隆云[1,2] 陈大霞[1,2] 李泉森[1,2] 

机构地区：[1]重庆市中药研究院中药种植研究所,重庆市400065 [2]重庆市中药良种选育与评价工程技术研究中心,重庆市400065

出　　处：《中国药房》2011年第7期654-657,共4页China Pharmacy

基　　金：国家科技攻关计划课题(2001BA701A32;2004BA604A04);重庆市科技计划项目(6455)

摘　　要：目的:对仙茅随机扩增多态性DNA(RAPD)反应体系进行优化筛选。方法:以仙茅基因组DNA为模板,通过单因子试验就RAPD反应体系中主要参数(Mg2+、dNTP、引物、模板、TaqDNA聚合酶)对扩增结果的影响进行研究,并找出各自的最适条件。结果:建立了适合仙茅RAPD分析的反应体系,即25μL反应体系中各组分的最适浓度分别为:1×PCRbuffer、2.0mmol·L-1Mg2+、200μmol·L-1dNTP、40ng引物、20ng模板、1IUTaqDNA聚合酶。结论:利用此优化反应体系对仙茅进行RAPD-PCR扩增,可得到清晰的图谱,证实了该体系稳定、可靠。OBJECTIVE： To study the optimization of RAPD reaction system for Curouligo orchioides. METHOD： Using genomic DNA extracted from C orchioides as template, the effects of the main parameters of RAPD reaction system （Mg2＋, dNTP, primer, template DNA, Taq DNA polymerase） on amplification results were tested by single factor experiment to determine its optimal levels. RESULTS： A suitable reaction system for C. orchioides was established, i.e. 25μL amplification reactions system containing 1×PCR buffer, 2.0 mmol·L^-1Mg2＋, 200μmol·L^-1 dNTP, 40 ng primer, 20 ng template DNA, 1 IU Taq DNA polymerase. CONCLUSION： This optimal reaction system can be used for RAPD-PCR amplification of C. orchioides. Obtained clear spectrum confirms the reliability of RAPD reaction system.

关 键 词：仙茅 随机扩增多态性DNA技术 反应体系 优化 

分 类 号：R284[医药卫生—中药学] Q943.2[医药卫生—中医学]