中国特有植物血水草RAPD反应体系的优化  

Optimization of RAPD Reaction System for Eomecon chionantha Hance,an Endemic Herbaceous of China

作　　者：胡雪华[1] 陈香 肖宜安[1] 廖信军[1] 鞠建文[1] 郭永久[1] 

机构地区：[1]井冈山大学生命科学学院,吉安343009 [2]广东省佛山市林业科学研究所,佛山528222

出　　处：《植物研究》2011年第1期89-94,共6页Bulletin of Botanical Research

基　　金：国家自然科学基金(30560025);江西省教育厅科学技术研究项目(GJJ09660);井冈山生态环境研究中心开放基金项目(EE-RC0501);教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET-07-0385)

摘　　要：为建立血水草的RAPD-PCR最佳反应体系,对影响血水草RAPD反应的Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物浓度和Taq聚合酶用量等因素进行优化。结果表明:25μL反应体系中含10×Buffer 2.5μL,1.8 mmol.L-1Mg2+,2UTaqDNA聚合酶,50 ng模板,0.2 mmol.L-1dNTPs,1.6μmol.L-1引物。扩增程序为:94℃预变性2 m in;预扩增:94℃变性20 s,36℃退火30 s,72℃延伸75 s,5个循环;扩增:94℃变性20 s,40℃退火30 s,72℃延伸60 s,40个循环;72℃保温20 m in,4℃保存。所建立的血水草RAPD-PCR反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力强、重复性好等特点,可以较好地应用于血水草的遗传多样性分析研究。In order to establish the optimal reaction of RAPD-PCR amplification for Eomecon chionantha Hance,the following parameters were optimized： the concentrations of Mg2＋,template DNA,dNTPs,primers and Taq DNA polymerase.The optimal RAPD-PCR reaction system was as follows a total volume of 25 μL contains 2.5 μL 10×Buffer,1.8 mmol·L-1 Mg2＋,2 U Taq DNA polymerase,50 ng template DNA,0.2 mmol·L-1 dNTPs and 1.6 μmol·L-1 primer.The reaction program fitting to the RAPD-PCR was as follows： initial denaturation at 94℃ for 2 min,followed by 5 beforehand cycles of 94℃ for 20 s,36℃ for 30 s,72℃ for 75 s;followed by 40 cycles of 94℃ for 20 s,40℃ for 30 s,72℃ for 60 s,and a final exposure to 72℃ for 20 min,then stored in 4℃.This RAPD-PCR system has some distinguising features including clear marker site,stable reaction system,reliable abundant polymorphisms,and better repeatability.It is suitable for the study on genetic diversity of E.chionantha.

关 键 词：RAPD 反应体系 优化 血水草 

分 类 号：S567.23[农业科学—中草药栽培]