人Gax基因真核表达载体的构建及在血管平滑肌细胞中的表达  

Construction of human Gax gene eukaryotic expression vector and its expression in vascular smooth muscle cells

作　　者：郑辉[1] 薛松[1] 连锋[1] 汪永义[1] 

机构地区：[1]上海交通大学医学院附属仁济医院心胸外科,上海200127

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2011年第1期29-32,共4页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：上海市科委基金资助项目(08411964100);上海市级医院临床科研资源共享平台经费资助(SHDC12007206)

摘　　要：目的:构建人Gax基因真核表达载体,并观察在兔血管平滑肌细胞中的表达。方法:通过PCR从pCMV-SPORT6-Gax质粒中扩增出人Gax cDNA片段,经双酶切后装入到有绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pEGFP-N1中,经限制性内切酶酶切分析和DNA测序鉴定后通过梭华-Sofast转染试剂介导重组质粒转染至兔血管平滑肌细胞中进行表达,通过荧光显微镜观察转染细胞的绿色荧光蛋白表达和RT-PCR扩增转染细胞的cDNA来鉴定Gax在兔血管平滑肌细胞中的表达。结果:琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物人Gax基因片段约915bp,与预期分子量相符;酶切分析和测序鉴定证明人Gax真核表达载体pEGFP-N1-Gax连接正确;荧光显微镜观察到重组质粒转染细胞中有绿色荧光蛋白表达,及RT-PCR证明转染细胞有人GaxmRNA表达。结论:成功构建人Gax基因的重组真核表达载体pEGFP-N1-Gax,并证实在兔血管平滑肌细胞中表达,为进一步研究Gax基因在心血管病中的作用提供了实验基础。AIM： To construct human Gax eukaryotic expression vector of pEGFP-N1-Gax, and observe its expression in the rabbit vascular smooth muscle cells （VSMCs）. METHODS： human Gax cDNA was obtained by polymerase chain reaction（PCR） from pCMV-SPORT6-Gax plasmid.

关 键 词：GAX基因 真核表达 基因转染 兔血管平滑肌细胞 

分 类 号：R543[医药卫生—心血管疾病] Q753[医药卫生—内科学]