人HMGB1 B box蛋白的表达、鉴定及其单克隆抗体的制备  

The expression,identification of human HMGB1 B box and preparation of monoclonal antibodies against HMGB1 B box

作　　者：苏兆亮[1] 王胜军[1] 周成林[1,2] 陈建国[3] 汪汀[1] 陶才华[3] 邵启祥[1] 许化溪[1] 

机构地区：[1]江苏大学检验医学研究所,江苏镇江212013 [2]镇江出入境检验检疫局,江苏镇江212008 [3]江苏大学附属人民医院检验科,江苏镇江212002

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2011年第1期68-70,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30871193;81001319);江苏省高校自然基金资助项目(09KJB310001);江苏省高校博士创新基金资助项目(CX09B-217Z);江苏省卫生厅面上项目(H200859)

摘　　要：目的:表达人HMGB1 B box蛋白,制备其单克隆抗体(mAb),为进一步研究HMGB1 B box在免疫调节和抗感染免疫中的作用奠定基础。方法:将pET28-HMGB1 B box转化DH5α摇菌表达,使用His标记的蛋白纯化柱纯化、鉴定后免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0细胞进行常规融合,经间接ELISA筛选阳性克隆,获得分泌人HMGB1 B box蛋白mAb的杂交瘤细胞株,通过ELISA、Western blot等方法鉴定其特性(mAb的效价、Ig类别及特异性)。结果:成功地建立了2株稳定分泌抗人HMGB1 B box的mAb细胞株,分别命名为1D2F4E3和2D4E3A2。2株mAb的免疫球蛋白类型均为IgG,Western blot显示,2株mAb均能与HMGB1 B box发生特异性反应,其滴度为1×106,mAb1 D2F4E3和2D4E3A2的A450值分别为0.324±0.093和0.296±0.085。结论:获得了2株分泌HMGB1 B box mAb的细胞株,为HMGB1 B box蛋白的生物学功能研究奠定了基础。AIM： To express human HMGB1 B box protein and obtain monoclonal antibodies （mAbs） against HMGB1 B box for further study of the function of human HMGB1 protein. METHODS： pET28-HMGB1 B box ptasmid transfected the DHSα, then expressed. And the extracted protein was purified by protein purification system.

关 键 词：HMGB1 蛋白表达 单克隆抗体 

分 类 号：R392.11[医药卫生—免疫学]