新基因PKHDL1产物Fibrocystin-L的抗体制备及其亚细胞定位的初步研究  

Preparation and characterization of a polyclonal antibody against human Fibrocystin-L

作　　者：连培文[1,2] 付玉龙[1] 李奥[1] 戴宝贞[1] 丁振伟[1] 李兰[1] 吴冠青[1] 

机构地区：[1]北京协和医学院中国医学科学院肿瘤医院,北京100021 [2]烟台毓璜顶医院,山东烟台266021

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2011年第1期78-81,共4页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30672483;30870501;81072688);北京市自然基金资助项目(7102133)

摘　　要：目的:制备FPC-L蛋白的多克隆抗体,对PKHDL1基因产物进行初步的细胞生物学研究。方法:根据生物信息学分析结果,PCR扩增编码人类FPC-L的N端633L-768K的cDNA片段。将该片段克隆到GST融合蛋白表达载体上,在IPTG诱导下产生人类FPC-L抗原(hFL-N)。纯化目的蛋白并制备兔抗FPC-L蛋白多克隆抗体。Western blot鉴定抗体特异性,并以间接免疫荧光法初步分析该蛋白在细胞内定位。结果:成功地构建了hFL-N片段原核表达载体,在大肠杆菌中实现表达,并制备了hFPC-L蛋白的多克隆抗体hFL-Np。通过生化和细胞学方法证实了该抗体针对FPC-L的特异性和揭示了该蛋白的亚细胞定位。结论:成功制备了高效价并具特异性的兔抗FPC-L蛋白多克隆抗体,并揭示了该蛋白主要表达于细胞质内,为进一步研究PKHDL1基因产物的生物功能奠定了基础。AIM： PKHDLI （the gene for Polycystic Kidney and Hepatic Disease Like-1 ） had been recently identified, but characteristics of the gene product, Fibrocystin-L （FPC-L）, still remain unknown. We therefore produced a rabbit polyclonal antibody hFL-Np to explore the cellular characteristics of this novel protein.

关 键 词：PKHDL1基因 Fibrocystin-L 多克隆抗体 亚细胞定位 

分 类 号：R392.11[医药卫生—免疫学]