人单磷酸腺苷激活的蛋白激酶催化亚单位α2基因shRNA载体的鉴定和表达  

Identification and expression of shRNA vectors targeting human AMPKα2

作　　者：卢俊[1] 徐世元[1] 崔睿[1] 张庆国[1] 雷洪伊[1] 

机构地区：[1]南方医科大学珠江医院麻醉科,广东广州510282

出　　处：《南方医科大学学报》2011年第1期86-89,共4页Journal of Southern Medical University

基　　金：国家自然科学基金(30972843)~~

摘　　要：目的构建针对人单磷酸腺苷激活的蛋白激酶催化亚单位α2(AMPKα2)基因的pGPU6/GFP/Neo-shRNA表达载体,转染SH-SY5Y细胞株,观测其对AMPKα2基因的沉默效果。方法利用Ambion在线设计软件设计针对人AMPKα2基因的shRNA干扰序列,克隆到pGPU6/GFP/Neo质粒载体上。对重组质粒进行DNA序列测定和酶切分析。用质脂体将重组质粒转导SH-SY5Y细胞株,经G418筛选阳性克隆后用RT-PCR和Western blot法检测AMPKα2的mRNA和蛋白表达水平。结果经DNA测序和酶切鉴定表明,4个shRNA表达载体构建成功。4个重组质粒之一的pGPU6/GFP/Neo-shRNAAMPKα2(3)能有效抑制AMPKα2基因在SH-SY5Y细胞株中的表达,抑制率为63%。结论成功构建了针对人AMPKα2基因的shRNA表达载体pGPU6/GFP/Neo-shRNAAMPKα2。pGPU6/GFP/Neo-shRNAAMPKα2(3)能有效抑制AMPKα2基因在SH-SY5Y细胞株中的表达,为将来应用其研究AMPK在细胞损伤中的作用奠定了基础。Objective To construct pGPU6/GFP/Neo-shRNA expression vector targeting human AMPKα2 gene and evaluate its silencing effect in SH-SY5Y cell line. Methods The oligonucleotides designed by Ambion online CAD software targeting AMPKα2 were cloned into the pGPU6/GFP/Neo vector.

关 键 词：局麻药 RNAi干扰 单磷酸腺苷激活的蛋白激酶催化亚单位α2 

分 类 号：Q789[生物学—分子生物学]