与圈卷产色链霉菌分化有关的一个新基因——sawD的研究  

A Novel Gene? 玸awD Related to the Differentiation of Streptomyces ansochromogenes Project Supported by the National Natural Science Foundation of China(No.39830010).

作　　者：刘钢[1] 田宇清[1] 陈蔚[1] 谭华荣[1] K.F.Chater M.J.Buttner 

机构地区：[1]中国科学院微生物研究所,北京100080 [2]JohnInnesCentre

出　　处：《生物工程学报》1999年第4期415-421,共7页Chinese Journal of Biotechnology

基　　金：国家自然科学基金;与英国皇家学会合作研究项目

摘　　要：距链霉菌发育分化控制启动子 Ｐ Ｔ Ｈ４ 直接控制的下游基因 ｐｒｏ Ｘ 间隔２４ 个碱基处存在一个部分开放阅读框 （ Ｏ Ｒ Ｆ） ， 根据序列分析推测为丝氨酸蛋白酶的一部分。以此部分 Ｄ Ｎ Ａ 序列为探针， 在构建的圈卷产色链霉菌７１００ 的 Ｄ Ｎ Ａ 文库中克隆到一个与链霉菌发育和分化有关的新基因， 称之为ｓａ ｗ Ｄ。序列测定及分析结果表明， 在１３２０ｂｐ 的 Ｄ Ｎ Ａ 序列中有一个完整的开放阅读框 （ Ｏ Ｒ Ｆ） ， 翻译起始位点为２１０ 位碱基处的 Ｇ Ｔ Ｇ， 终止密码子 Ｔ Ｇ Ａ 位于序列的９９９ 位碱基处。在距翻译起始位点 Ｇ Ｔ Ｇ 上游４ 个碱基间隔处有典型的核糖体结合位点区域 Ｇ Ａ Ｇ Ｇ Ｇ Ａ。在计算机蛋白文库中进行了同源性比较研究， 结果表明２６３个氨基酸的蛋白产物与 Ｃａｕｌｏｂａｃｔｅｒ ｃｒｅｓｃｅｎｔｕｓ 的依赖于 Ａ Ｔ Ｐ 的丝氨酸蛋白酶有４４７ ％ 的同源性， 其中存在功能活性区的丝氨酸保守位点 （ Ｇ Ｐ Ｓ Ａ Ｇ） 。基因功能研究表明， ｓａｗ Ｄ 在圈卷产色链霉菌发育分化中与气生菌丝分隔和色素的合成有关。该基因被阻断或破坏后， 使野生型圈卷产色链霉菌的分化停止在气生菌丝阶段， 不能形成具有灰色色素的孢子，A 1 3kb DNA fragment was cloned from total DNA library of Streptomyces ansochromogenes by Southern hybridization.Nucleotide sequencing analysis indicated that the 1320bp DNA fragment contains a complete open reading frame (ORF).In search of databases,the deduced product of ORF containing 213 amino acids,is homologous to the serine protease of Caulobacter cresceatus, and a conserved serine catalytic active site (GPSAG)is existent.The gene was designated as sawD(Streptomyces ansochromogenes whi gene No.4).The function of this gene was studied with the strategy of gene disruption,and the result showed that the sawD may be related to sporulation and especially to the sporulation septation in Streptomyces ansochromogenes. The preliminary result indicated that sawD mutant could produce abundant pigment in contrast with wild type,it seems that sawD gene may be involved in pigment biosynthesis,and also this gene is dispensable for biosynthesis of nikkomycin in Streptomyces ansochromogenes.

关 键 词：链霉菌分化 sawD基因 结构与功能 

分 类 号：Q939.132[生物学—微生物学]