慈姑蛋白酶抑制剂基因转化小白菜获抗虫转基因植株  

INTRODUCTION OF ANARROWHEADPROTEINASE INHIBITORGENEIN Brassica campestrisssp. chinensisL. ANDEXPRESSIONINTRANSGENICPLANTS

作　　者：张智奇[1] 周音[1] 钟维瑾[1] 张建军[1] 殷丽青[1] 陈全庆[1] 龚蓁蓁[2] 谢伟军[2] 叶俊强 邹振[2] 

机构地区：[1]上海市农业科学院作物育种栽培研究所,上海201106 [2]中国科学院上海生物化学研究所,上海200031

出　　处：《上海农业学报》1999年第4期4-9,共6页Acta Agriculturae Shanghai

基　　金：上海市农业委员会科技兴农重点攻关项目

摘　　要：通过根癌农杆菌的介导将慈姑蛋白酶抑制剂基因（ＡＰＩ）导入小白菜（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｃａｍ ｐｅｓｔｒｉｓｓｓｐ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓＬ．）。Ｋａｎａｍ ｙｃｉｎ 筛选浓度为１０～１５ ｍ ｇ·Ｌ－ １，抑制农杆菌生长的抗生素选用Ｃａｒｂｅｎｉｃｉｌｌｉｎ，浓度为３００～５００ ｍ ｇ·Ｌ－ １。小白菜带柄子叶被农杆菌感染后，抗性芽的诱导频率为０．２％ ～２．０％ 。加入适量的ＡｇＮＯ３ 不仅可以抑制过度生长的农杆菌，还可以使抗性芽的诱导频率约提高到５％ 。试验获得转基因植株９７ 株。其中８１ 株ＰＣＲ 检测为阳性。部分转基因植株经ＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ 及ＲＴＰＣＲ 的进一步分子检测分析，证明ＡＰＩ基因已被整合进小白菜植株的基因组中。转基因小白菜的叶片离体饲虫初步试验结果表明：对鳞翅目害虫菜青虫的生长发育有一定的抑制作用，其幼虫摄食转基因植株叶片后，平均体重、体长均分别比对照（摄食非转基因植株叶片）减轻和短小，且约有２７．８％ 的幼虫不能正常羽化，而对照全部正常羽化。The arrowhead proteinase inhibitor(API)gene was introduced into sm all Chinese cabbage (B. chinensis) via Agrobacterium tum efaciens m ediated transform ation. Cotyledon explants with petioles w ere co cultivated w ith Agrobacterium strain LBA 4404 carring pBI APIplasm id.The pBI APIcontained aneom ycin phosphotransferaseⅡgenefor Kanam ycin resistance.Following co cultivation,the explantsweretransferred to fresh shoot induction m edium with 10～15m g·L- 1 Kanamycin and 300～500m g·L- 1 carbenicillin.The transform ation ratesw ereabove0.2% ～2.0% .In thepresence ofAgNO3 in them edium ,the transform ation rates were up to 5% . Transgenic plants were initially identified by Kanam ycin,and subsequently the APIgene wasconfirm ed by PCR Southern analysis.Insect biossay dem onstrated thattheaccumulation ofAPIin transgenicplantscould reducedam age by Pierisrapaelarvaeand inhibitlarvaldevelopm ent.

关 键 词：小白菜 慈姑蛋白酶 抑制剂 抗虫性 转基因植株 

分 类 号：S634.034[农业科学—蔬菜学]