两步化学转化法构建猪圆环病毒2型ORF2基因重组腺病毒质粒  

作　　者：郭全海[1,2,3] 陈陆[1] 王川庆[1] 吴德峰[3] 李志娟[1] 王永生[1] 刘扬科[1] 

机构地区：[1]河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002 [2]商丘职业技术学院,河南商丘476000 [3]福建农林大学,福建福州350002

出　　处：《江苏农业科学》2010年第5期48-50,共3页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：国家高技术研究与发展计划"863"项目(编号:2007AA100606)

摘　　要：为了利用化学转化法快速构建携带猪圆环病毒2型ORF2基因的重组腺病毒质粒以便获得表达该基因的重组腺病毒,首先把骨架质粒pAdeasy-1通过化学法转化到氯化钙法制备的E.coliB J5183感受态菌中,通过含氨苄青霉素的LB平板筛选出含骨架质粒的阳性菌B J5183/p,再次用化学法把插入有猪圆环病毒2型ORF2基因的穿梭质粒rpShuttle-CMV-276经Pm eⅠ酶切线性化后转化到B J5183/p感受态细胞中进行同源重组,再在含卡那霉素的LB平板上培养,筛选出卡那霉素抗性菌进行质粒抽提纯化,酶切并电泳鉴定,获得重组阳性质粒rPAD-276。结果表明,运用2步化学转化法构建重组腺病毒质粒是一种简便、快捷且容易操作的方法。

关 键 词：化学转化法 猪圆环病毒2型ORF2基因 重组 腺病毒质粒 构建 

分 类 号：Q784[生物学—分子生物学]