重组质粒pUDK-HGF的中试纯化工艺  

Pilot-scale production of recombinant plasmid pUDK-HGF

作　　者：胡春生[1,2] 王延亮[1] 卢育新[1] 程晓晨[1] 刘琳[1] 张通[2] 张庆林[1] 

机构地区：[1]军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京100850 [2]内蒙古工业大学化工学院,呼和浩特010051

出　　处：《生物工程学报》2011年第2期247-252,共6页Chinese Journal of Biotechnology

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划)(No.2001AA217061)资助~~

摘　　要：pUDK-HGF是携带人肝细胞生长因子的裸质粒,目前已进入I期临床试验,因此需要大量符合药学规格的质粒DNA。文中建立了pUDK-HGF中试规模纯化制备的新工艺。流程包括:发酵、离心收获菌体、碱裂解、超滤浓缩碱裂解液、Sephacryl S-1000层析除去RNA并更换缓冲液、plasmidselect捕获超螺旋质粒DNA、琼脂糖凝胶6BFF除盐。新工艺可获得浓度为2.0 mg/mL、纯度在1.70以上的裸质粒原液,符合相关质量标准,并避免使用动物源性的酶及有毒试剂。pUDK-HGF,the recombinant plasmid DNA encoding human hepatocyte growth factor（HGF）,can treat ischaemic disease.A great quantity of pharmaceutical pUDK-HGF is needed.A pilot-scale production process of pUDK-HGF was established based on a new chromatographic media（plasmidselect）,including fermentation,cell harvesting,alkaline lysis,ultrafiltration,RNA removing and buffer exchanging on Sephacryl S-1000,capturing supercoiled plasmid DNA with plasmidselect,and removing the salt with Sepharose 6BFF.The process does not use RNase enzyme and toxic solvents.

关 键 词：重组质粒 纯化 质量检测 肝细胞生长因子 

分 类 号：R346[医药卫生—基础医学]