抗伪狂犬病病毒gC抗体制备及其gC蛋白表达  

Generation of Anti-PRV gC Antibodies and Analysis of PRV gC Expression

作　　者：刘庆伟[1,2] 邱亚峰[1] 王晓杜[1] 郭林[1] 刘超[1] 沈阳[1] 李向东[1] 单虎[2] 马志永[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院上海兽医研究所兽医公共卫生实验室,上海200241 [2]青岛农业大学动物科技学院,山东青岛266109

出　　处：《中国畜牧兽医》2011年第3期108-112,共5页China Animal Husbandry & Veterinary Medicine

基　　金：国家自然科学基金青年基金(30700593);中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目

摘　　要：用纯化的重组蛋白His-gCN813制备抗PRV-gC抗体,并分析伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gC蛋白在真核细胞的表达情况。本研究以提取的病毒基因组为模板,PCR克隆PRV gC全长基因,构建gC真核表达质粒p3xFLAG-gC,在真核细胞中表达gC基因;纯化蛋白His-gCN813制备的抗体,Western blotting和间接免疫荧光(IFA)检测到p3xFLAG-gC转染真核细胞和PRV感染细胞中的gC蛋白。结果表明本试验成功构建了PRVgC基因真核表达系统,获得了特异性抗PRV gC抗体,重组gC真核表达质粒p3xFLAG-gC转染Vero细胞,表达的重组蛋白gC为72 ku,PRV感染Vero细胞,表达的gC蛋白为55、72和94 ku,主要定位在细胞浆,gC蛋白可以作为PRV感染的指示分子,为下一步研究PRV和宿主相互作用及PRV的复制奠定了基础。The purified prokaryotic expression of PRV gC functional domain named His-gCN813 was used as immunogen to generate antibodies,and the PRV gC expressed in eukaryotic cell was analysised.The full length of PRV gC was cloned from PRV genome to construct recombinant plasmids p3xFLAG-gC for eukaryotic expression.The expression of PRV gC in p3xFLAG-gC transfected cells and PRV infected cells were analyzed with the anti-gC antibodies by Western blotting and immunofluorescence assay.The results indicated that the eukaryotic expressed system of PRV gC were constructed,gC specific poly

关 键 词：伪狂犬病病毒 抗PRVgC抗体 Westernblotting 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]