重组真核质粒pERFP-C1-hTudor-SN-SN(1～4)的构建和表达  

Construction and Expression of pERFP-C1-hTudor-SN-SN (1-4) Recombinant Eukaryotic Plasmids

作　　者：付晓[1] 朱梦瑜[1] 高星杰[2] 钱宝鑫[1] 王保亚[1] 赵虹[1] 葛林[3] 杨洁[2,3] 

机构地区：[1]天津医科大学免疫教研室,300070 [2]天津医科大学基础医学研究中心,300070 [3]天津医科大学生化教研室,300070

出　　处：《天津医药》2011年第2期97-100,共4页Tianjin Medical Journal

基　　金：国家科技部"863"项目(项目编号:2007AA02Z115);国家自然科学基金资助项目(项目编号:30670441;30970562;30670802;30811130394;30911130165;30970582);天津市科委国际合作项目(项目编号:07JCZDJC07300);国家自然科学重大研究计划培育项目(项目编号:90919032);国家教育部高等学校博士学科点专项科研基金(项目编号:20091202110001);天津市教委重点项目(项目编号:2008ZD01);天津医科大学科学基金(项目编号:2007ky03;2009xk09)

摘　　要：目的:将人类Tudor-SN蛋白SN(1～4)基因片段分别定向连入pERFP-C1质粒,使Tudor-SN蛋白SN各功能片段与红色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法:以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切法将目的片段连接到pERFP-C1载体上,再将构建成功的pERFP-C1-Tudor-SN-SN(1～4)重组质粒转染入HeLa细胞内,在荧光显微镜下观察红色荧光蛋白的表达。结果:以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜下观察到红色融合蛋白的表达。结论:重组pERFP-C1-h Tudor-SN-SN(1～4)质粒构建及表达成功。Objective： To construct eukaryotic red fluorescent protein （RFP） expressing recombinant plasmids,pERFP-C1-hTudor-SN-SN（1-4）,which contain SN（（1-4） fragments of human Tudor-SN.Methods： The genes of Tudor-SN fragments were amplified by PCR from the recombinant pSG5-Tudor-SN-flag plasmid and inserted into pERFP-C1 fluorescent expressing vector with EcoRⅠ and BamHⅠ site.These recombinant pERFP-C1-hTudor-SN-SN （1-4） plasmids were transfected into HeLa cells and the expression of red fluorescent fusion proteins was examined by fluorescence microscope.Results： The SN（1-4） fragments of Tudor-SN were sequenced correctly and detected in the products of the restriction single/double enzyme digestion.The red fluorescent fusion proteins were observed in HeLa cell after the transfection.Conclusion： These recombinant eukaryotic plasmids of pERFP-C1-Tudor-SN（1-4） were constructed successfully and expressed effectively.

关 键 词：质粒 遗传载体 发光蛋白质类 重组融合蛋白质类 转染 HELA细胞 人类Tudor-SN蛋白 

分 类 号：R382.5[医药卫生—医学寄生虫学]