万寿菊SSR-PCR反应体系的优化  

Optimization in SSR-PCR Reaction System of Marigold

作　　者：杨帆[1] 曾丽[1] 赵子刚[1] 张嫔[1] 龚霄雯[1] 

机构地区：[1]上海交通大学农业与生物学院,上海200240

出　　处：《上海交通大学学报（农业科学版）》2011年第1期22-27,共6页Journal of Shanghai Jiaotong University(Agricultural Science)

基　　金：上海市农委农技服(2003)第1号

摘　　要：实验材料为色素万寿菊雄性不育两用系‘9901AB’,通过对SSR-PCR反应体系中的主要因素dNTPs、引物及模板DNA进行最优条件筛选,建立了适合于万寿菊雄性不育两用系的SSR-PCR反应体系:2.5μL 10×buffer、40 ng模板DNA、2μL 10μmol.μL-1引物、1.0 U Taq酶、1.2μL 2.5 mmol.μL-1dNTP,ddH2O补足体系至25μL;PCR循环程序为:94℃预变性2 min;38个循环(94℃变性30 s、56℃退火30 s、72℃延伸1 min),72℃延伸10 min。采用优化后的SSR-PCR体系,将已公布的向日葵15对引物运用于万寿菊雄性不育两用系材料上,结果表明万寿菊与向日葵之间可以共享部分SSR引物信息。The experimental material is marigold yellow pigment male sterile line ＇9901AB＇.The SSR-PCR was established within 25 μL reaction volumes containing 2.5 μL 10 × PCR amplification buffer,40 ng template DNA,2 μL 10 μmol·μL-1 primers,1.0 U Taq DNA polymerase,1.2 μL 2.5 mmol·μL-1 dNTP and made to volume with sterile double-distilled water by screening the optimal main factors that dNTP,primers and template DNA in SSR-PCR reaction system.The SSR-PCR was built using the conditions：94 ℃ for 2 min;38 cycles of 94 ℃ for 30 s,56 ℃ for 30 s,72 ℃ for 1 min;72 ℃ for 10 min.Results show that some of the SSR primers developed from sunflower（Helianthus annuus） could be directly used in marigold genome study.

关 键 词：万寿菊 简单重复序列(SSR) 正交实验 体系优化 

分 类 号：S682.1[农业科学—观赏园艺]