RNAi技术抑制HCMV-IE1表达的在体实验研究  

Silence of HCMV-IE1 gene by RNA interference in vivo

作　　者：谢妮[1,2] 袁建辉[3] 韩艳萍[1,2] 吴瑾滨[1,2] 

机构地区：[1]深圳大学附属第一医院 [2]深圳市第二人民医院医学实验中心,深圳518035 [3]深圳市疾病预防控制中心,深圳518020

出　　处：《国际病理科学与临床杂志》2010年第6期461-464,共4页Journal of International Pathology and Clinical Medicine

基　　金：国家自然科学基金(30500599);广东省深圳市科技计划项目(201002054)~~

摘　　要：目的:研究RNA干扰(RNA interference,RNAi)对体内人类巨细胞病毒-立即早期基因1(human cy-tomegalovirus immediate-early gene 1,HCMV-IE1)表达的沉默作用,为靶向HCMV-IE1的基因治疗提供科学的实验依据。方法:选取60只雄性昆明种小鼠,并分为3组,分别为实验对照组(注射生理盐水)、病毒感染组(注射HCM-VAD169株病毒液)和RNA干扰组(染毒后第2天注射转染了表达RNAi载体的人胚肺成纤维细胞液);采用PCR法检测小鼠体内HCMV基因的表达水平;采用ELISA检测动物血清中HCMV-IgM的含量;采用免疫组织化学和Western免疫印迹技术分别测定小鼠体内HCMV-IE1的蛋白水平。结果:PCR结果表明干扰组比病毒感染组的HCMV的基因表达下调20%;ELISA结果表明RNAi能使动物血清中HCMV的含量降低为19%;免疫组织化学和Western免疫印迹结果证实,干扰组和病毒感染组的HCMV-IE1蛋白水平分别降低为17.6%和18.5%。结论:RNAi技术能有效地抑制目的基因在体内的表达,有可能用于靶向HCMV-IE的基因治疗。Objective To evaluate the silence effect of RNAi on human cytomegalovirus immediate-early gene 1（HCMV-IE1） in vivo and provide the data for gene therapy of human cytomegalovirus（HCMV）.Methods Sixty Kunming male mice were randomly divided into 3 groups： an infection group（n=20）,injected with HCMVAD169;a control group（n=20）,injected with saline solution;and an interfering group（n=20）,injected with human embryonic lung fibroblast（HEL） expressed RNAi.The expression of HCMV-IE1 mRNA and protein and HCMV IgM level in the serum were examined by RT-PCR,Western blot（or immunohistochemistry）,and ELISA,respectively.Results HCMVIE mRNA and protein expression in the interfering group was reduced by 20% and 17.6%（by immunohistochemistry） or 18.5%（by Western blot）,respectively.The HCMV IgM level in the serum was reduced by 19%.Conclusion RNAi technology could be efficiently inhibit the gene expression in vivo and may be useful for gene therapy of HCMV.

关 键 词：RNA干扰 人类巨细胞病毒 感染 基因表达 基因治疗 

分 类 号：R440[医药卫生—诊断学]