核心蛋白聚糖真核表达载体的构建及其在A549中的表达  

作　　者：吕俊锋[1] 张玉成[2] 杜珍武[2] 张桂珍[2] 

机构地区：[1]吉林大学第二医院放射线科 [2]吉林大学中日联谊医院中心实验室,吉林长春130033

出　　处：《中国老年学杂志》2011年第5期803-806,共4页Chinese Journal of Gerontology

基　　金：吉林省发展与改革委员会计划资助项目(200621550)

摘　　要：目的建立人核心蛋白聚糖(decorin,DCN)真核表达载体,并在A549细胞中进行表达,为进一步研究其抗肿瘤作用奠定基础。方法用PCR法扩增出DCN分子编码序列的cDNA全长,与pcDNA3.1(+)载体连接,构建真核表达载体pcDNA3.1-decorin,并转化到大肠杆菌JM109中扩增以获得重组载体,应用双酶切、PCR以及测序鉴定此重组载体;脂质体介导重组载体转染A549细胞,经G418筛选建立稳定转染细胞株,分别采用RT-PCR、免疫组化法和Western印迹法检测其表达。结果获得了约1 080 bp大小的特异性DNA片段;PCR产物与真核表达载体进行连接,经过双酶切、PCR以及测序鉴定证实分泌型DCN cDNA片段正确插入真核表达载体pcDNA3.1中。RT-PCR方法可见转染组mRNA表达明显增多,免疫组化和Western印迹方法可见转染组细胞DCN蛋白表达明显增高。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-decorin,建立了稳定转染DCN的A549细胞株。

关 键 词：核心蛋白聚糖 基因表达 转染 A549细胞 

分 类 号：Q786[生物学—分子生物学]