支气管哮喘患者血清对内皮穿越模型中单核细胞分化为树突状细胞的作用  

Induction of monocytc-derived dendritic cell differentiation by asthmatic serum in a transendothelial trafficking model

作　　者：周林福[1] 王文璐[1] 李红岩[1] 张明顺[2] 季晓辉[2] 何韶衡[3] 黄茂[1] 殷凯生[1] 

机构地区：[1]南京医科大学第一附属医院呼吸内科,南京 210029 [2]南京医科大学微生物学和免疫学系,南京 210029 [3]南京医科大学第一附属医院中心实验室,南京 210029

出　　处：《中华结核和呼吸杂志》2011年第3期169-173,共5页Chinese Journal of Tuberculosis and Respiratory Diseases

基　　金：国家自然科学基金（30400191和30570797）;江苏省医学重点人才项目（RC2007043）;江苏省六大人才高峰项目（068035）;人事部和教育部留学回国人员科技启动项目（200886和FD09）;南京市科技计划项目（200901078）

摘　　要：目的探讨支气管哮喘（简称哮喘）患者血清和正常血清对内皮穿越模型中单核细胞向树突状细胞（DC）分化和功能的作用及其机制。方法在江苏省哮喘联盟数据库中选择2008年5月至2009年5月轻一中度哮喘患者12例，募集匹配的健康志愿者12名，常规分离血清和外周血单个核细胞，免疫磁珠法获得单核细胞。选择健康产妇5名，胰酶消化法获得人脐静脉内皮细胞（第2代），培养融合至内皮细胞单层。在内皮细胞上方加入单核细胞及哮喘血清（哮喘组）或正常血清（对照组），构建内皮穿越模型。硝酸银染色法观察单核细胞来源的树突状细胞（MDDC）迁移行为。于48h收集MDDC，扫描电镜观察形态学特征，电泳迁移率实验检测核因子KB（NF-KB）活性，流式细胞术、ELISA和混合淋巴细胞反应分别检测其表型和功能。结果（1）在内皮穿越模型中，单核细胞2h后发生正向穿越，48h后发生逆向穿越并分化为DC。（2）与穿越前单核细胞[CD14（81±6）％、人白细胞抗原DR（HLA—DR）（24±5）％、CD80（2．8±2．0）％、CD86（14±4）％、CD83（0．9±0．8）％]比较，对照组MDDC的CD14[（20±5）％]显著下降（F=49．01，P〈0．05）、HLA-DR、CD80、CD86和CD83[（43±4）％、（17．9±3．5）％、（43±11）％和（6．7±1．8）％]均显著增高（均P〈0．05），但CD83仍较低，为未成熟DC。（3）与对照组比较，哮喘组MDDC的HLA—DR和CD。[（55±6）％和（59±12）％]相仿（F值分别为15．29和35．97，均P〉0．05）、CD80和CD83[（49．7±10．2）％和（30．2±6．8）％]显著增高（F值分别为34．Ol和20．68，均P〈0．05），为成熟DC。并且，哮喘组MDDC呈典型的树枝样突起，其NF—KB活性、白细胞介素-12pTO水平和T细胞增殖作用[（100±11）％、（568±43）ng／L和（2033±198）cpm]较对照组[（12±3）％、（220±35）ng／L和（952±64）cpm]Objective To explore the effect of asthmatic and healthy serum on differentiation and function of monocyte-derived dendritic cells （MDDC） in a transendothelial trafficking model. Methods The sera and peripheral blood mononuclear cells （PBMC） were separated from 12 asthmatic patients and 12 healthy volunteers, and monocytes were selected from PBMC using magnetic beads. The trypsin-digested human umbilical vein endothelial cells （HUVEC） at passage 2 from 5 healthy lying-in women were used to construct the transendothelial trafficking model under asthmatic or healthy serum, wherein MDDC were identified by silver nitrate staining and scanning electron microscopy. Nuclear factor KB （NF-KB） activitywas determined by electrophoretic mobility shift assay. Flow cytomettT, ELISA and mixed leukocyte reaction were relevantly utilized to detect the phenotype, cytokine and T cell proliferation. Results （ 1 ） Monocytes traversed through HUVEC monolayer after 2 h, and reverse-transmigrated to develop into DC 48 h later. （ 2 ） The healthy seium stimulated monocytes into immature MDDC with lower CD14 [（ 20± 5）%] （F=49.01, P〈0.05）, and higher HLA-DR, CDs0, CD86 and CD83[（43±4）%, （17.9 ＋ 3.5）%, （43 ± 11）% and （6.7 ± 1.8）%, respectively] （F = 10. 35 -40.17, all P 〈0.05） than monocytes did before transmigration at 0 h [ CD14 （81 ± 6）%, HLA-DR （24±5）%, CD80 （2. 8 ± 2. 0）%, CD86 （ 14± 4） % and CD83 （0. 9 ± 0. 8 ） %, respectively ]. （ 3 ） The asthmatic serum stimulated monocytes into mature MDDC, characteristic of dendrites, with similar HLA-DR and CD86 [ （ 55± 6） % and （ 59± 12）%] （F=15.29 and 35.97, allP〉0.05）, higher CD80 and CD83[（49.7±10.2）% and （30.2±6. 8）% ] （F=4. 01 and 20. 68, all P〈0. 05）, accompanied by increased levels of NF-KB activity, IL-12 p70 and T cell proliferation [ （100 ± 11）%, （568±43） ng/L and （2033 ± 198） cpm, respectively] （F= 49.23 - 350. 84, all P 〈 0. 05 ） relative to

关 键 词：哮喘 树突细胞 血清 NF—KB 内皮穿越模型 单核细胞 

分 类 号：R562.25[医药卫生—呼吸系统]