氟致体外培养人脐静脉血管内皮细胞损伤的实验观察  

Human umbilical vein vascular endothelial cell injury induced by fluoride in vitro

作　　者：边建朝[1] 蔺新英[2] 杨晓霞[1] 侯小东[2] 樊婷[2] 朱秋丽[2] 

机构地区：[1]山东省地方病防治研究所特检科,济南250014 [2]山东大学公共卫生学院营养与食品卫生研究所

出　　处：《中国地方病学杂志》2011年第2期142-147,共6页Chinese Jouranl of Endemiology

基　　金：山东省人民政府、山东省国土资源厅资助项目（1212010310306）

摘　　要：目的观察不同剂量的氟对体外培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）的影响。方法在HUVEC培养液中加入不同剂量的氟化钠（NaF），分别为0（对照）、100、400、700、1000、2000μmol／L，每组设6个复孔．连续培养48h，收集细胞培养液与细胞。瑞氏一吉姆萨染色观察细胞形态，吖啶橙荧光染色测定细胞凋亡．四唑氮蓝（MTT）比色法检测细胞活性；分光光度法检测细胞培养液中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）活性、丙二醛（MDA）水平及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）活性；RT—PCR法检测细胞iNOSmRNA和eNOSmRNA表达水平；双抗体夹心ELISA法检测细胞培养液中细胞黏附因子（ICAM—1）、血管黏附因子（VCAM－1）水平。结果随染氟剂量增加，HUVEC细胞数量减少，结构改变；400～2000μmol／LNaF组SOD活性[（6．627±0．213）、（6．668±0．152）、（5．935±0．122）、（4．755±0．182）kU／L]较对照组[（7．457±0．398）kU／L]降低（P〈0．05或〈0．01），GSH—Px活性[（481．284±43．785）、（492．223±16．474）、（382．762±25．167）、（293．687±24．881）kU／L]较对照组[（585．078±47．323）kU／L]降低（P〈0．05或〈0．01），MDA水平[（0．609±0．011）、（0．646±0．016）、（0．852±0．013）、（1．188±0．045）nmo/L]较对照组f（0．512±0．027）nmo/L]升高（P〈0．05或〈0．01）；iNOS活性[（3．604±0．115）、（3．615±0．075）、（3．848±0．103）、（4．275±0．079）kU／L]较对照组[（2．798±0．136）kU／L]增强（P均〈0．01），iNOSmRNA表达增强，eNOS活性[（5．539±0．079）、（5．503±0．064）、（5．226±0．142）、（4．809±0：107）kU／L]较对照组[（5．996±0．155）kU／L]减弱（P〈0．05或〈0．01），eNOSmRNA表达减弱；ICAM－1水平[（0．852±0．102）、（0．886±0．061）、（0．Objective To study the effect of different concentrations of fluoride on cultured human umbilical vein vascular endothelial cells （HUVEC）. Methods Different doses of sodium fluoride （NaF） were added to HUVEC culture medium, fluoride concentrations were 0（control）, 100,400,700,1000,2000 μmol/L, respectively, 6 re-set hole in each group. After continuous culture for 48 h, cells and culture medium were collected. Cell morphology was studied by Wright-Giemsa staining; cells apoptosis was determined by acridine orange fluorescence staining ; cell activity was measured by methyl thiazolyl tetrazolium （MTT） assay ; superoxide dismutase （SOD）, glutathione peroxidase（GSH-Px） activity, malonaldehyde（MDA） content, induced nitricoxide synthase（iNOS）, and endothelia nitricoxide synthase （eNOS） activity in cell culture medium were determined by speetrophotometry; cell iNOS mRNA and eNOS mRNA expression were detected by RT-PCR; intercellular adhesion molecule-1 （ICAM-1） and vascular cell adhesion molecule-1 （VCAM-I） levels were detected by double antibody sandwich ELISA method.Results With increased dose of fluoride, HUVEC cells decreased, the structure changed. In 400 - 2000 μmol/L group, the SOD activity[ （6.627 ± 0.213）, （6.668 ± 0.152）, （5.935 ± 0.122）, （4.755 ± 0.182）kU/L] was lower than those of the contrnl group[ （7.457 ± 0.398）kU/L, P 〈 0.05 or 〈 0.01 ], GSH-Px activity[ （481.284 ± 43.785）, （492.223 ± 16.474）, （382.762 ± 25.167）, （293.687 ± 24.881 ）kU/l,] was also lower than those of the control group [ （585.078 ± 47.323）kU/L, P 〈 0.05 or 〈 0.01], MDA level[ （0.609 ± 0.011 ）, （0.646 ± 0.016）, （0.852 ± 0.013）, （ 1.188 ± 0.045 ）nmol/L] was higher than those of the control group[ （0.512 ±0.027）nmol/L, P 〈 0.05 or 〈 0.01 ] ; iNOS activity[ （3.604 ± 0.115）, （3.615 ± 0.075）, （3.848 ± 0.103）, （4.275 ± 0.079）kU/L] also was higher than those of the control group[ （2.798 ± 0.1

关 键 词：氟 脐静脉 内皮细胞 一氧化氮 细胞黏附因子 

分 类 号：R285.5[医药卫生—中药学]