重组原核质粒GST-hTudor-SN-SN（1～4）的构建及表达  

Construction and Expression of GST-hTudor-SN-SN （1

作　　者：苏超[1,2,3] 朱梦瑜[1,2,3] 高星杰[1,2,3] 王鑫廷[1,2,3] 张桂敏[1,2,3] 付晓[1,2,3] 葛林[1,2,3] 杨洁[1,2,3] 

机构地区：[1]国家教育部免疫微环境与疫病重点实验室,天津市300070 [2]天津市细胞与分子免疫学重点实验室,天津市300070 [3]天津医科大学基础医学研究中心,免疫学教研室天津市300070

出　　处：《医学分子生物学杂志》2010年第6期483-487,共5页Journal of Medical Molecular Biology

基　　金：国家高技术研究发展计划资助项目（863计划） （No.2007AA02Z115）,国家自然科学基金（No.30670441,30970562,30670802,30811130394.30911130165,30970582）,天津巿科委国际合作项目（No.07JCZDJC07300）,国家自然科学基金重大研究计划项目（No.90919032）.国家教育部高等学校博士学科点专项科研基金（No.20091202110001,天津市教委重点项目（No.2008ZD01）

摘　　要：目的 将人类Tudor-SN（tudor staphylococcal nuelease）蛋白SN（1～4）基因片段分别定向连入pGEX-4T-1质粒,使Tudor-SN蛋白sN各功能片段与（;＂蛋白在大肠埃希菌BL21细胞内融合表达.方法 以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的 基因,利用EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切法将目的 片段连接纠pGEX-4T-1载体卜,再将构建成功的GST-hTudor-SN-SN（1～4）重组质粒转化人大肠埃希菌BL-21内,IPTG诱导表达后再以考马斯亮蓝染色法检测GST融合蛋白的表达.结果 以单/双酶切和基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,考马斯亮监染色法观察到GST融合蛋白的正确表达.结论 重组原核GST.hTudor-SN-SN（1-4）质粒成功构建和表达.Objective To construct prokaryote GST expressing recombinant plasmids, GST- hTudor-SN-SN （ 1 -4）, which contains SN （ （ 1 -4） fragments of human Tudor-SN. Methods The Tudor-SN tiagments were amplified by PCR from the recombinant pSG5-Tudor-SN-flag plasmid and inserted into GST expressiug vector pGEX-4T-1 at EcoR I and Sal I sites. The recombinant （;ST-hTudor-SN-SN （1 -4） plasmid were transformed into Escherichia coli BL-21 cells. The expression/ of GST fusion proteins was induced by IVTG and examined by Coomassie Brilliant Blue staining. Results The SN （1 -4） fragments of Tudor-SN were sequenced correctly and detected in the products of Ecoll I/Sa] I double restriction enzyme digestion. The GST fusion proteins wen abserved by Coomassie Brilliant Blue staining. Conclusion The recombinant prokaryote GST-hTudor-SN （1 - 4） plasmid was constructed successfully and expressed effectively.

关 键 词：人类Tudor-SN蛋白 PGEX-4T-1 重组质粒 融合蛋白 

分 类 号：Q782[生物学—分子生物学]