SV40PolyA片段串联拷贝数目影响GFP报告基因表达  

作　　者：尹康[1] 马欢[1] 王秀芳[1] 谢英[1] 冯晶晶[1] 杨钦清[1] 吕占军[1] 

机构地区：[1]河北医科大学实验动物学部遗传研究室,河北省实验动物重点实验室,石家庄050017

出　　处：《中国科学：生命科学》2011年第3期187-194,共8页Scientia Sinica(Vitae)

基　　金：河北省自然科学基金(批准号:C2008001065和C2011206043)资助项目

摘　　要：Alu元件(约280bp)是人类基因组中的重要重复序列,串联Alu呈长度依赖性下调GFP报告基因表达,在Alu串联序列上游正向或反向插入SV40PolyA(简称PolyA,240bp),解除Alu串联序列对GFP基因的抑制作用.PCR法扩增PolyA反序(PolyAas)不同位置的60bp片段,插入pAlu14质粒(14个Alu正向串联插入pEGFP-C1)的GFP基因和Alu14之间,瞬时转染HeLa细胞,通过荧光显微镜观察和Northern检测,1F1R(PolyAas5′端第1个60bp片段)和4F4R(自PolyAas5′端计算第4个60bp片段)不能活化基因;2F2R和3F3R(PolyAas中间的2段)可以解除Alu14对GFP基因的抑制作用.将2F2R和3F3R各自反复首尾串联,分别插入pAlu14质粒GFP基因和Alu串联序列之间,瞬时转染HeLa细胞,用插入4个2F2R的pAlu28,插入4个3F3R的pAlu18,插入4个3F3R的pAlu28作长度对照,以排除由于插入片段长度增加可能对结果造成的干扰,发现2～4个拷贝的2F2R和3F3R活化基因作用高于一个拷贝的同样片段,但是多于8拷贝以后,活化GFP基因作用减弱.本实验证明,SV40 PolyAas至少含有两段活化基因序列,活化基因序列(2F2R,3F3R)的最适活化基因条件需要合适的拷贝数.

关 键 词：拷贝数 SV40PolyA 重复序列 GFP ALU 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]