乙肝表面抗原结合蛋白的红色荧光示踪分子的表达纯化和功能鉴定  

Expression, Purification and Characterization of Red Fluorescent Tracer Molecule of HBsAg Binding Protein

作　　者：顾晨曦[1] 朱乃硕[1] 

机构地区：[1]复旦大学生命科学学院生物医学研究院,上海200433

出　　处：《生物技术通报》2011年第5期183-189,共7页Biotechnology Bulletin

基　　金：国家自然科学基金项目（30571650,30471512）,“863”高技术目标导向课题（2006AA022462）,“973”周家重点基础研究发展项目（2006CB504304）

摘　　要：乙肝表面抗原结合蛋白（HBsAg binding protein，SBP）是本实验室发现的一种可以与乙肝表面抗原HBsAg特异性结合的人源蛋白，已被证实具有增强乙肝疫苗免疫效果的作用。DsRed—Monomer是来源于DsRed的人工突变体，作为蛋白表达的报告基因在真核细胞中使用。为探究SBP的作用机理，通过基因工程方法将该基因与DsRed—Monomer基因连接，克隆到原核表达载体，表达带有红色荧光的融合蛋白，该蛋白通过荧光激发检测显示荧光强度与蛋白量成正比例关系。同时该融合蛋白经过ELlSA方法检测可以与HBsAg特异性结合，使用常规方法和荧光量检测两种方法测定得到的该蛋白与HBsAg的亲和常数相似。首次证实了DsRed—Monomer在原核表达中可作为报告基因进行研究和使用，建立了利用荧光量检测蛋白的方法，与常规ELISA方法比较证明，大大缩短了试验时间和步骤，可以更方便的应用于分子示踪及其功能研究。HBsAg binding protein（SBP） shows a specific binding ability to HBV surface antigen HBsAg. Previous work proved an ability of SBP could enhance the immune response of HBsAg vaccine. DsRed-Monomer is a mutant derived from DsRed which could emit the red fluorescence under sunlight. To investigate the function of SBP,we constructed DsRed-SBP fused pET-28a plasmid to express the red fluorescent tracer molecule labeled SBP in E. coli BI21 system. The luminous intensity and protein content showed a linear relationship. The ELISA test showed that DsRed-SBP could specifically bind to HBsAg,and Keff between DsRed-SBP and HBsAg could be got by two different methods. These results showed that DsRed-Monomer could be used as a visual reporter tag for proteins expressed in E. coli and the protein brought a foundation for further research on screening,tracing and observing in vivo or cells.

关 键 词：乙肝表面抗原结合蛋白 红色荧光蛋白 乙肝表面抗原 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]