人超氧化物歧化酶-胸腺素α1融合蛋白在毕赤酵母中的表达与活性检测  

Expression and Activity Determination of Fusion Protein hSOD-Thyα1 in Pichia pastoris

作　　者：周宇飞[1] 周峻岗[1] 袁汉英[1] 吕红[1] 

机构地区：[1]复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室,上海200433

出　　处：《复旦学报（自然科学版）》2011年第2期178-184,共7页Journal of Fudan University：Natural Science

基　　金：上海市非政府间国际合作计划资助项目(9540707400);海外及港澳学者合作研究基金资助项目(30828026);上海市生物医药重大科技攻关资助项目(05DZ19302)

摘　　要：为了增强胸腺素α1(Thyα1)的稳定性和免疫功能,采用胸腺素α1与人超氧化物歧化酶(hSOD)融合的策略,构建了6His-hSOD-(G4S)1-Thyα1和6His-hSOD-(G4S)2-Thyα1 2个融合基因,并分别在毕赤酵母中实现了高水平表达.重组表达的融合蛋白经过Ni-NTA亲和层析纯化后,纯度达到80%以上.用邻苯三酚自氧化法和E-玫瑰花法分别测定了人超氧化物歧化酶酶活性和胸腺素活性.结果表明,融合蛋白6His-hSOD-(G4S)1-Thyα1和6His-hSOD-(G4S)2-Thyα1的超氧化物歧化酶比活性分别为120 998±5 206 U/mg和31 279±1 121 U/mg;融合蛋白在1×10-7mol/L浓度下的E玫瑰花结率分别为(38.4±1.6)%和(36.6±0.2)%.结果说明:融合蛋白中由5个氨基酸G4S构成的连接肽能有效地保障2个蛋白质各自的结构特征,使融合蛋白既有超氧化物歧化酶的活性,又具有胸腺素的活性.To improve the stability and immunization activity of thymosin α1,thymosin α1-encoding gene,thyα1,was fused to hSOD by using（G4S）n（n=1—2） as linker and expressed in Pichia pastoris.The recombinant fusion proteins were purified by Ni-NTA Resin Chromatography.The purity of the fusion protein is over 80% based on the SDS-PAGE and BandScan analysis.The purified 6His-hSOD-（G4S）1-Thyα1 and 6His-hSOD-（G4S）2-Thyα1 separately exhibited hSOD activity of 120998U/mg and 31279U/mg,and the E-rosette formation rate of 38.4% and 36.6% at a protein concentration of 1×10^-7mol/L,respectively.The results reported here suggest that the presence of one G4S linker between two individual proteins can efficiently keep the structure of each of fused proteins.The fusion proteins keep both high SOD activity and high Thyα1 activity.

关 键 词：胸腺素Α1 人超氧化物歧化酶 融合蛋白 Ni-NTA亲和层析纯化 活性测定 

分 类 号：Q812[生物学—生物工程]